凡纳滨对虾性腺抑制激素基因的克隆与表达

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性腺抑制激素(gonad inhibiting hormone,GIH)是甲壳动物X-器官—窦腺复合体分泌的一种神经内分泌多肽类激素,对雌、雄个体的性腺发育、蜕皮及甲基法尼酯(methyl farnesoate,MF)的分泌均有抑制作用。本文以性腺发育成熟的凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)为研究对象,利用RACE技术克隆获得GIH基因cDNA片段(含3’UTR),预测GIH基因编码的氨基酸序列,并利用生物信息学方法进行分析;利用半定量RT-PCR方法检测凡纳滨对虾八个不同发育时期(受精卵、无节幼体、蚤状幼体、糠虾幼体、仔虾25天、仔虾30天、仔虾35天和仔虾40天),以及雌雄成体不同组织(肌肉、脑、眼柄、胃肠、鳃、心脏、卵巢和精巢)中的表达,并检测了环境内分泌干扰物壬基酚(nonylphenol,NP,100μg/L和0.01μg/L)对凡纳滨对虾雌虾眼柄中GIH基因表达的影响。结果表明:凡纳滨对虾GIH cDNA片段长为683bp,其中3’非编码区(3’UTR)为518bp,可读编码框162bp,编码54个氨基酸,在Poly(A)尾前15bp处存在AATAAA加尾信号。凡纳滨对虾GIH与斑节对虾相似性最高,达到96%,与刀额新对虾相似性为72%。通过与Genbank上已知氨基酸序列进行蛋白比对,发现凡纳滨对虾GIH中具有CHH蛋白家族共有的4个保守的半胱氨酸残基。凡纳滨对虾GIH基因在受精卵、幼体发育阶段及仔虾时期的眼柄中均有表达,35天时达到最高值(0.936±0.021),且与其他各期存在显著性差异(P<0.05),幼体发育阶段GIH表达量显著高于受精卵期(P<0.05),仔虾时期GIH表达量显著高于幼体阶段(P<0.05);在凡纳滨对虾雌、雄个体不同组织中,仅在眼柄和脑处检测到GIH基因的表达,表明凡纳滨对虾GIH基因与神经活动有关;NP处理抑制凡纳滨对虾雌性个体眼柄中GIH基因的表达且存在一定的剂量依存关系,但抑制效果不显著(P>0.05)。
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