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目的:观察硫酸乙酰肝素(heparan sulfate, HS)和阿霉素(adriamycin, ADM)联合应用的抗C3H小鼠移植乳腺癌作用,进一步探讨二药联用抗C3H小鼠移植乳腺癌作用机制。 方法:1.HS的制备培养人乳腺上皮癌 MCF-7细胞株,待细胞生长达汇合期时收集培养液,DEAE-Sepharose-CL-6B离子交换色谱分离,紫外检测下收集峰组分、透析、蛋白含量测定、硫酸软骨素ABC酶化学降解其中的硫酸软骨素蛋白聚糖,5%~15%线性梯度 SDS-PAGE电泳分析,链霉蛋白酶降解硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(HSPG)的核心蛋白,降解产物经DEAE-Sepharose-CL-6B离子交换色谱柱、透析,得到硫酸乙酰肝素(HS)链,定量、分装、冷冻干燥备用。2.C3H小鼠移植乳腺癌模型制备取42只6周龄雌性C3H小鼠,于前肢腋窝皮下注射乳腺癌细胞悬液(8×107细胞/ml)0.2ml/只。3.抗乳腺癌作用观察将接种乳腺癌小鼠随机分成6组:生理盐水(NS,0.2ml/只)组、HS(15mg/kg)组、ADM(4mg/kg)组和 HS(15mg/kg)分别伍用高(4mg/kg)、中(2mg/kg)、低(1mg/kg)ADM剂量组。接种后第4天分别腹腔注射相应药物,NS、HS1次/天,ADM1次/5天,连续给药21天。(1)观察、测定肿瘤生长情况及小鼠的一般状况,绘制肿瘤生长曲线。用药结束后第2天取血处死小鼠,剥离肿瘤,称瘤体重量,计算抑瘤率;计算小鼠胸腺、脾脏指数,检测心肌酶水平,取左心室行病理检查。(2)Western-blot法测定肝素酶I(heparanase I, HRP I)的表达;(3)免疫组织化学法,检测HS链对小鼠肿瘤组织微血管密度(MVD)的影响;(4) Caspase-3活性检测试剂盒测定Caspase-3活性。 结果:1.HS和ADM联合用药对小鼠乳腺肿瘤生长速度的影响给药结束后第2天处死小鼠,测定乳腺肿瘤体积,生理盐水组、单用HS组及单用ADM组分别为:2.05±0.50mm3,1.06±0.41 mm3和0.91±0.59 mm3,HS联合应用高、中、低剂量ADM组分别为0.68±0.28 mm3,0.82±0.42 mm3和0.72±0.33 mm3。各处理因素的抑瘤率分别为:HS21.61%,ADM31.02%,HS+ADM(H)55.21%, HS+ADM(M)42.92%,HS+ADM(L)44.74%。2. HS和ADM联合用药对小鼠免疫器官的影响生理盐水组、HS及HS与高、中、低剂量的ADM联用组小鼠的胸腺指数分别为2.75±1.12、2.89±0.97、2.57±0.87、2.75±0.82和2.82±0.92,各处理组之间无显著性差异(P>0.05),而 ADM处理组为1.20±0.05,表现为胸腺指数的显著降低(P<0.01或P<0.05)。脾脏指数,生理盐水组、HS及HS与高、中、低剂量的ADM联用组分别为6.03±2.15、6.31±1.88、2.54±1.33、5.71±1.44、5.88±1.93和6.02±1.84,亦表现为联合用药组对于脾脏功能的影响显著优于单用 ADM组。3. HS和ADM联合用药对小鼠心脏的影响 ADM处理组各心肌酶水平均高于生理盐水组和HS处理组(P<0.05),HS和ADM联用组对心肌酶的影响与生理盐水组、HS处理组无明显差别(P>0.05)。ADM组小鼠心脏切片显示有充血和心肌细胞肿胀、变形。4.HS和HS与ADM联用组HRP I的表达与生理盐水组、ADM组相比明显减少。5. HS和HS与ADM联用组的MVD明显低于阴性对照组与ADM组。6.HS和HS与ADM联用组的Caspase-3活性较阴性对照组明显提高(P<0.01),与ADM组比较无明显差异(P>0.05)。 结论: 1.HS和HS与ADM联合用药均能抑制C3H小鼠移植性乳腺癌肝素酶I的表达,减少微血管密度和增强Caspase-3活性。 2.HS和HS与ADM联合用药能减慢C3H小鼠移植性乳腺癌的生长速度。有意义的是这一联合用药似不构成对荷瘤动物的胸腺、脾脏指数及总体情况的影响。 3.HS与ADM可能具有协同抗肿瘤作用,这一联合用药可通过降低ADM的用量,降低后者的不良反应。