珍珠李炭疽菌侵染特性及检测技术研究

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龙滩珍珠李是从广西天峨县实生野李中选育出的新品种,具有成熟期晚、耐运输、品质优且丰产稳产等优点,是广西贫困山区实施产业扶贫工程的重点产业。珍珠李炭疽病是珍珠李上的主要病害之一,主要为害叶片,使叶片焦枯脱落,果实减产,造成巨大经济损失。本实验室前期对广西天峨县龙滩珍珠李炭疽病病原进行了鉴定,主要包括4个种:果生炭疽菌(Colletotrichum fructicola)、胶孢炭疽菌(C.gloeosporioides)、西加罗炭疽菌(C.cigarro)和暹罗炭疽菌(C.siamense),其中C.fructicola为珍珠李炭疽病菌的优势种。本研究以珍珠李炭疽病的4种病原为研究对象,观察其侵染过程,测定寄主范围,筛选快速检测技术,以期为珍珠李炭疽病的有效防治提供理论依据和实践经验。主要研究结果如下:1.观察了4种炭疽病菌侵染珍珠李的过程,结果发现炭疽菌侵染珍珠李叶片后,在3 h时萌发形成芽管和菌丝,伴随少量附着孢的形成,9-12 h时附着孢成熟,24-48 h时能观察到菌丝不断蔓延,分生孢子开始消融,120 h时会出现分生孢子盘和新的分生孢子。测定了不同种菌株的致病力,结果表明不同种炭疽菌对珍珠李叶片致病力差异显著,致病力最强的为暹罗炭疽菌BY15-C2,致病力最弱的为果生炭疽菌DS1-G-1。2.测定了4种珍珠李炭疽菌的寄主范围,结果表明,在供试的13个植物寄主中,果生炭疽菌菌株DS1-G-1可侵染辣椒、百香果、芒果、柿树、咖啡、蜜桔、葡萄、百合、火龙果和红薯;胶胞炭疽菌菌株BY11-C能侵染香蕉、辣椒、百香果、芒果、柿树、咖啡、蜜桔、葡萄、百合、火龙果和红薯;西加罗炭疽菌菌株BY12-C2能侵染辣椒、百香果、芒果、柿树、咖啡、蜜桔、葡萄、百合、火龙果和红薯;暹罗炭疽菌菌株BY15-C2能侵染香蕉、辣椒、百香果、芒果、柿树、咖啡、蜜桔、葡萄、百合、火龙果和红薯。在不同寄主来源的果生炭疽菌对珍珠李致病性的研究中,发现来源于金光菊、牛大力、黄金果、荔枝、大青枣、茉莉花、柑橘、香蕉等8个寄主的果生炭疽菌均对珍珠李叶片具有致病性。3.通过对炭疽菌特异检测引物的筛选,获得了扩增珍珠李炭疽的PCR检测引物CGF/CGR,可以检测到全部4个种的珍珠李炭疽,灵敏度达10-3ng/μL;LAMP检测引物Cg F3/Cg B3/Cg FIP/Cg BIP/Cg LF/Cg LB,可以检测到4个种的珍珠李炭疽菌和全部其他不同种的炭疽菌,灵敏度可达10-4ng/μL;荧光定量PCR引物Col Tq F1/Col Tq R1,可以检测到4个种的珍珠李炭疽菌和大部分其他不同种的炭疽菌,灵敏度达10-4ng/μL。其中常规PCR引物CGF/CGR的检测效果最差,LAMP检测引物Cg F3/Cg B3/Cg FIP/Cg BIP/Cg LF/Cg LB和荧光定量PCR引物Col Tq F1/Col Tq R1的检测效果较好,灵敏度和准确度较高。使用以上引物对不同时期采集于田间的珍珠李幼嫩叶片和枝条进行病原菌检测,结果表明,2月份叶片和枝条上都可以检测到病原菌,从2月到8月的带菌量整体呈上升趋势,8月到达最大值,本研究结果为珍珠李炭疽病的发生流行和田间防控提供了科学依据。
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