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目的:探讨藏药二十五味松石丸对ANIT(α-萘异硫氰酸酯)致大鼠胆汁淤积型肝损伤的保护作用及其机制。方法:确定ANIT诱导大鼠胆汁淤积型肝损伤的ANIT药物剂量,建立ANIT致大鼠胆汁淤积型肝损伤的模型,进行藏药二十五味松石丸的药效学评价。对大鼠血清学指标ALP(碱性磷酸酯酶)、ALT(丙氨酸氨基转移酶)、AST(天门冬氨酸氨基转移酶)、DBIL(直接胆红素)、TBIL(总胆红素)及TBA(总胆汁酸)进行检测,结合肝脏组织病理学变化,综合评价藏药二十五味松石丸对ANIT致大鼠胆汁淤积型肝损伤的影响。通过实时荧光定量(RT-PCR)法检测肝组织中相关基因mRNA相对表达量的变化,包括Fxr、Cyp7a1、Mrp2、Mrp3、Bsep、Ntcp,初步考察藏药二十五味松石丸对胆汁淤积型肝损伤可能的作用机制。在基因水平研究的基础上,再通过Westernblot方法检测肝组织中相关蛋白表达量的变化,探究藏药二十五味松石丸对ANIT致大鼠胆汁淤积型肝损伤的保护作用机制。结果:藏药二十五味松石丸的药效学研究显示,生理状况观察结果:与模型组相比,UDCA(熊去氧胆酸)组和藏药二十五味松石丸各剂量组大鼠的生理状态均有一定程度的改善。血清学指标结果:与空白对照组相比,模型组血清中ALT、AST、ALP、DBIL、TBIL和TBA的酶活性均显著增高(P<0.01);与模型组相比,UDCA组和二十五味松石丸方各组血清中ALT和ALP的酶活性均显著降低(P<0.01),AST的酶活性无统计学意义(P>0.05);UDCA组和二十五味松石丸低剂量组血清中TBA含量均显著降低(P<0.01);二十五味松石丸低剂量组血清中DBIL、TBIL含量的变化有统计学意义(P<0.05),二十五味松石丸中剂量组、高剂量组血清中DBIL、TBIL含量的变化无统计学意义(P>0.05)。大鼠肝脏病理切片结果:藏药二十五味松石丸可显著改善ANIT模型组大鼠肝脏病理变化;mRNA分析结果显示,藏药二十五味松石丸能显著改变胆汁酸代谢相关基因的表达水平,与空白对照组比较,模型组大鼠肝组织中,Fxr、Mrp2、Ntcp基因的mRNA表达有显著下调(P<0.01),Cyp7a1、Mrp3基因的mRNA表达有显著上调(P<0.01);与模型组比较,各给药组Shp的mRNA表达显示二十五味松石丸低、中、高剂量组大鼠肝组织的表达明显上调(P<0.01,P<0.05);大鼠肝组织Fxr、Mrp2基因的mRNA表达显示各给药组均无统计学意义(P>0.05);大鼠肝组织Ntcp基因mRNA表达显示二十五味松石丸低剂量组的表达明显上调(P<0.05),各给药组Cyp7a1基因的mRNA表达均显示有明显下调(P<0.05);各给药组Mrp3基因的mRNA表达均显示有显著下调(P<0.01);UDCA组大鼠肝组织Bsep基因的mRNA表达明显下调(P<0.05);大鼠肝组织Bsep基因的mRNA表达显示二十五味松石丸低、中、高剂量组无统计学意义(P>0.05)。蛋白表达结果显示,与空白对照组相比,模型组大鼠肝组织中Fxr、Shp蛋白的表达量均显著降低(P<0.01),UGT2B4蛋白的表达量明显升高(P<0.05)。与模型组相比,二十五味松石丸各剂量组肝组织中Fxr、Shp蛋白的表达量均明显升高(P<0.01,P<0.05);UDCA组肝组织中Fxr、Shp蛋白表达量变化无统计学意义(P>0.05);UDCA组、二十五味松石丸中剂量组、高剂量组肝组织中UGT2B4蛋白的表达量显著升高(P<0.01)。结论:藏药二十五味松石丸对ANIT致大鼠胆汁淤积型肝损伤具有明显的保护作用,其保护作用机制可能是通过介导FXR信号通路,调控其下游基因及下游蛋白,抑制胆汁酸过量分泌及合成,使胆汁酸的代谢趋于稳态,进而改善胆汁淤积。对胆汁酸的转化过程无明显调控作用。