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淋巴微循环障碍是休克微循环障碍学说的重要组成部分,与休克预后密切相关。前期研究发现,外源补充17β-雌二醇（17β-estradiol,E2）能明显改善失血性休克大鼠肠系膜淋巴管收缩性,内质网应激（endoplasmic reticulum stress,ERS）激动剂可抑制E2的良好作用,ERS在雌激素改善失血性休克大鼠淋巴管收缩性中的作用机制需要进一步阐明。因此,本研究应用大鼠失血性休克模型,观察休克后和给予E2后的肠系膜淋巴管组织ERS标志蛋白表达,以明确E2是否可以降低淋巴管的ERS。鉴于淋巴管平滑肌细胞（lymphatic smooth muscle cells,LSMC）收缩是淋巴管功能的主要内在动力,良好的LSMCs收缩功能是淋巴液转运的基础。为此,本研究应用LSMCs,以缺氧复氧（hypoxia/reoxygenation,H/R）细胞模型模拟失血/复苏过程,进一步建立衣霉素（tunicamycin,TM）诱导的ERS细胞模型,共同研究ERS在E2及雌激素受体（estrogen receptors,ERs）调节LSMCs收缩中的作用与机制。首先,将12只Wistar雄性大鼠随机分为4组（n=3）,假手术组（Sham）、给予E2的假手术组（Sham+E2）、休克组（Shock）、给予E2的休克组（Shock+E2）;建立失血性休克模型,留取整个肠袢,在手术显微镜下分离肠系膜淋巴管,并收集至裂解液中,统一提取蛋白,采用Western Blot技术检测淋巴管ERS标志蛋白葡萄糖调节蛋白糖（glucose regulated protein 78kda,GRP78）表达。结果显示,Sham组与Sham+E2组大鼠淋巴管组织GRP78表达无明显差异,Shock组大鼠淋巴管组织GRP78表达显著高于Sham组,而Shock+E2组大鼠淋巴管组织GRP78表达显著低于Shock组。结果表明,补充E2可显著降低失血性休克引起的淋巴管ERS。其次,建立LSMCs原代培养技术,采用免疫荧光法、Western Blot以及流式细胞术对LSMCs进行鉴定和纯度分析,并用免疫荧光法和Western Blot技术检测LSMCs中雌激素受体的表达。结果显示,原代培养的大鼠LSMCs的α-SMA蛋白呈阳性表达,细胞纯度达99.4%;大鼠LSMCs雌激素受体ERα、GPR30呈阳性表达,ERβ呈弱阳性表达。这一结果表明,本文成功建立了LSMCs原代培养技术,为后续实验提供了基础。第三,取传至3～5代的LSMCs,建立H/R细胞模型。实验分为对照组（Control）、雌激素对照组（E2）、H/R组、H/R+E2、ERα激动剂PPT治疗H/R组（H/R+PPT）、ERβ激动剂DPN治疗H/R组（H/R+DPN）、GPR30激动剂G1治疗H/R组（H/R+G1）、H/R与E2和ERα、β抑制剂ICI182,780联合作用组（H/R+E2+ICI）、H/R与E2和GPR30抑制剂G15联合作用组（H/R+E2+G15）,采用CCK-8法检测各组细胞活力,Transwell小室培养后以观察各组细胞收缩能力;Western Blot技术检测GRP78蛋白表达。细胞活力结果显示,LSMCs经H/R处理后,细胞活性显著降低,E2、DPN、PPT、G1分别处理均显著提高了LSMCs经H/R处理后的细胞活性,ICI、G15均显著抑制了E2提高H/R后LSMCs活性的作用。细胞收缩性研究显示,E2显著提高了经H/R处理后LSMCs的收缩性。Western Blot结果显示,对LSMCs进行H/R处理,发现LSMCs经不同时间缺氧后再复氧3小时,反映LSMCs是否出现ERS的标志蛋白GRP78均未发生显著变化,经E2治疗也未发现LSMCs的GRP78有明显变化。实验结果表明,H/R降低了LSMCs的活性与收缩性,但未引起ERS;E2提高了H/R处理后LSMCs的活性与收缩性,且提高LSMCs活性的作用是通过ERs实现的。最后,取传至3～5代的LSMCs细胞,建立TM诱导的ERS细胞模型。实验分为Control、E2、TM、TM+E2、TM+PPT、TM+DPN、TM+G1、TM+E2+ICI以及TM+E2+G15,检测细胞活力、细胞收缩力以及ERS相关蛋白GRP78、ATF6、IRE1和PERK的表达。结果显示,经TM处理后,LSMCs活性与收缩性均显著降低,ATF6、GRP78、IRE1表达均显著增高;E2处理显著提高了TM处理后LSMC的细胞活性与收缩性、降低了ATF6、GRP78、IRE1表达;DPN、PPT、G1分别处理均提高了细胞活性与收缩性,显著降低了TM处理后LSMC的ATF6、GRP78表达,G1降低了TM处理后LSMC的IRE1表达;ICI、G15均显著抑制了E2提高TM处理后LSMC活性与收缩性以及降低ATF6、GRP78、IRE1蛋白表达的作用。实验结果表明,E2通过ERs降低了TM作用LSMCs的ERS,进而提高了LSMCs的细胞活性与收缩性。综合上述结果,E2治疗降低了失血性休克大鼠肠系膜淋巴管组织的ERS;H/R未能引起LSMCs发生ERS,但H/R降低了LSMCs细胞活性和细胞收缩性,E2通过ERs提高了H/R处理后LSMCs的活性与收缩性;TM处理可诱导LSMCs发生ERS、降低了细胞活性和收缩性,E2通过ERs降低了LSMCs的ERS,进而提高了LSMCs的细胞活性与收缩性。总之,雌激素改善失血性休克大鼠淋巴管收缩性的作用与抑制ERS有关。本文丰富了失血性休克后淋巴循环功能障碍的基础理论,靶向E2为临床防治重症失血性休克提供了新思路。