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目的：细胞凋亡是缺氧缺血性脑损伤（Hypoxic-ischemic brain damage,HIBD）过程中神经细胞死亡的一种形式，特别在迟发性神经元死亡（delayed neuronal death，DND）过程中起十分重要的作用。目前研究认为细胞凋亡与凋亡相关基因Bc1-2家族表达的变化密切相关，转化生长因子-β1（TGF-β1）通过增加Bc1-2产物可间接调控神经细胞的凋亡。神经节苷脂（Gangliosides）是一种糖鞘脂，为大多数哺乳动物细胞膜的组成成分，在神经系统中尤为丰富。而单唾液酸四己糖神经节苷脂（Monosialotetrahexosylganglioside，GM1）是哺乳类神经节苷脂的主要种类，它对神经细胞的分化、生长、轴浆转运和再生起着重要作用。但TGF-β1在新生儿缺氧缺血性脑病（Hypoxic-ischemicencephalopathy，HIE）中的作用及GM1脑保护作用的机制尚不清楚。本研究通过观察新生鼠HIBD脑内TGF-β1蛋白、凋亡相关蛋白Bc1-2的表达与神经细胞凋亡的变化规律及应用GM1治疗后对其影响，探讨新生鼠HIBD时TGF-β1、Bc1-2表达与细胞凋亡的关系及神经节苷脂GM1脑保护作用的机制。 方法：结扎新生7日龄SD大鼠左颈总动脉后吸入80ml·L-1浓度氧 第四军医大学硕士学位论文 Zh，建立缺氧缺血性脑损伤（HIBD）模型。①制备新生鼠缺氧缺血性 脑损伤（未治疗组）模型。②制备 GMI治疗组模型，脑缺氧缺血（HI） 后每日腹腔注射 GMI注射液。应用苏木素－伊红（HE）染色、原位缺 口末端标记（TUNEL）及SP免疫组化方法检测新生鼠脑缺氧缺血后 存活不同时间TGF pl、B。12及凋亡细胞在大鼠皮质和海马表达的动 态变化及GM；对其影响。 结果：1．新生鼠缺氧缺血性脑损伤模型组较对照组TGF p；、BCI上 表达及凋亡细胞数显著增强：①脑缺氧缺血后Zh大脑皮质和海马开 始出现凋亡细胞，sh较为明显，24h达到高峰后渐下降。直至 120h 仍可见少许凋亡细胞。②脑缺氧缺血后sh，大脑皮质和海马开始出 现TGF－pl表达，12h和48hTGF－pl出现两次表达高峰。晚期表达TGF－ pl的免疫阳性细胞与凋亡细胞均出现在缺血半暗带内。③脑缺氧缺 血后Zh，大脑皮质和海马k－2的表达开始增加，48h达到高峰，72h 开始下降，至 120h降至较低水平。 2．GM治疗组较未治疗组①凋亡细胞数显著减少：GM治疗组 细胞凋亡的时程与未治疗组一致、分布极其相似，从治疗后sh开始至 72h各观察时间点凋亡细胞数目明显减少，与未治疗组比较，其差异 具有显著性意义o＜0刀1)，表明外源性＊M；治疗明显减轻了皮质和 海马神经细胞凋亡。②GM；治疗组与未治疗组比较，TGF巳、BC12 表达未见明显改变，其差异无显著性意义o＞0刀5人 表明＊M；抑制 神经细胞凋亡的机制与TGF e；、BC12表达无关。 结论：1．缺氧缺血性脑损伤后TGFel、BCI－2表达及凋亡细胞数显著 增强，表明缺氧缺血性脑损伤可诱导TGF－pl、B。12表达及神经细胞 凋亡，TGF－pl、BCI－2在缺氧缺血性脑损伤后神经细胞凋亡中起重要 作用。 3 第四军医大学硕士学位论文 2．TGF D；、B＊ 表达的高峰均为缺氧缺血后48h，稍后于神经 细胞凋亡的高峰，表明TG卜p；可能通过上调k1－2表达间接调控神 经细胞凋亡。 3．GMI治疗后神经细胞凋亡数目显著减少，表明神经节昔脂GMI 可部分抑制缺氧缺血性脑损伤诱导的神经细胞凋亡，对缺氧缺血性脑 损伤后的脑组织确有保护作用；而GM治疗后TGF－凡、BCI上表达 未见明显改变，表明GMI抑制神经细胞凋亡的机制与TGF－pl。BC12 表达无关。神经节昔脂GMI抑制神经凋亡细胞可能是其临床治疗缺氧 缺血性脑损伤的分子机制之一，但其具体机制尚待进一步研究。