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目的:1.收集10个不同产地地锦草药材,对其三种主要成分进行定性定量分析以及初探其抗氧化活性;2.地锦草药材对变异链球菌的活性影响研究;3.研究地锦草药材对正常大鼠肾上皮细胞(NRK)的自噬影响;分析地锦草药材抑制宫颈癌活性。方法:本文采用薄层色谱法(TLC)对10批地锦草中没食子酸(GA)、槲皮素(QU)、山奈酚(KA)三种主要成分的定性分析;采用高效薄层色谱法(HPTLC)对地锦草三种成分进行含量测定;采用薄层色谱-生物自显影技术(TLC-DPPH法)考察10批地锦草药材的抗氧化活性成分及其抗氧化能力;采用高效液相色谱法(HPLC)测定10批地锦草药材中GA、QU和KA的含量;采用96孔微板法考察地锦草对变异链球菌的抑制活性效果,并且使用聚光共聚焦显微镜(LSCM)对其进行形态观察和抑菌效果考察;采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检测地锦草提取物及三个主要成分对Hela细胞存活率的影响;采用激光共聚焦显微镜(CLSM)观测受药后的NRK细胞的细胞形态三维结构变化、自噬小体和凋亡现象;采用Hoechst 33342染色法以及流式细胞技术(FCM)检测细胞凋亡情况;采用透射电子显微镜(TEM)观测发生自噬和凋亡的细胞的超微结构变化;采用蛋白免疫印迹杂交(Western blot)技术对细胞自噬的标志性相关蛋白进行特异性检测。结果:研究结果表明,TLC分析优选安徽良臣硅胶GF254为固定相,以氯仿:乙酸乙酯:甲酸(5.2:4.4:1)为展开剂,10个不同地区的地锦草TLC结果发现,各地区成分基本一致,但含量有所差异;研究发现,江西地区的样品含没食子酸最高,新疆昌吉地区的样品中槲皮素含量最高,新疆喀什地区的样品中山奈酚含量最高;TLC-DPPH法对10批地锦草药材进行抗氧化活性的筛选,发现地锦草中至少有3种成分具有抗氧化活性,其中包括GA、QU和KA,并且发现不同批次间地锦草抗氧化能力有所差异。HPLC法所测定得10批地锦草药材中含有的没食子酸、山奈酚和槲皮素含量范围为2.3342-4.1443、0.4636-1.5922、0.3831-3.1500mg/g。地锦草药材对变异链球菌的生长及其生物膜的形成,均表现出一定的抑制作用。MTT法和流式细胞仪测定结果表明,地锦草水和醇提取物、GA、QU、KA在对应浓度下对Hela细胞生长有抑制作用,且表现出时间和浓度依赖性;LSCM和Hoechst33342染色观察比较后可知,地锦草水提取物和GA可引起细胞发生自噬及凋亡效果较其他样品更明显;Western blot方法考察自噬相关标志性蛋白LC3-Ⅱ表达水平随着药物浓度的升高而呈上升趋势,P62蛋白水平随药物浓度的升高而降低,与其他实验结果相呼应。结论:综上研究所述,本课题建立了地锦草药材的高效薄层色谱分析方法以及薄层色谱-生物自显影技术对抗氧化活性成分的筛选,是一种将成分分离和活性测定结合为一体的药物筛选方法,同时结合薄层指纹图谱,为地锦草化学成分分析,活性筛选及药材的优选提供可靠依据。采用HPLC法测定地锦草中GA、QU和KA的含量,为地锦草质量的控制和药用资源的开发利用提供科学依据。同时考察了地锦草提取物的抑制变异链球菌作用,为地锦草可能用于口腔疾病的防治提供理论基础。本课题还主要研究了,地锦草提取物及三种主要成分对宫颈癌细胞有抑制活性,并且实验证明可能是通过引起细胞自噬及凋亡而发挥其抗宫颈癌活性,可为其临床上应用于宫颈癌及相关疾病提供依据。