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缺血预处理(IPC)是指心肌在短暂缺血后能耐受随后较长时间缺血损伤的现象，是迄今发现的最强的内源性心肌保护机制，对临床心血管疾病的预防和治疗有重要意义。但是IPC作为一种内源性机制，其本身并无治疗学价值，无法将其直接用于临床治疗，因此寻找药物以模拟IPC保护作用是目前研究的重点和最终目的所在。对IPC机制的研究发现有多种物质参与了此保护作用，其中一氧化氮(NO)作为体内一种重要的气体信使分子，其供体硝酸酯类药物，由于扩张冠脉血管而作为冠心病心绞痛的首选药，安全用于临床已有上百年的历史，而NO是否具有直接的心肌保护作用尚不明确。对NO模拟IPC作用的深入研究，将为缺血心肌保护提供新的治疗思路，同时为进一步开发稳定、不易产生耐受性和长效的NO供体类药物提供理论依据。 本实验建立了心肌细胞缺氧预处理(HPC)模型，并对其早期和延迟保护作用的机制进行了研究；在此基础上，分别探讨了NO供体SNAP模拟的心肌细胞预处理早期和延迟保护作用及其机制。 1．HPC的心肌细胞保护作用及其机制 本实验在心肌细胞HPC模型基础上，采用比色法检测心肌细胞LDH活性和MTT法检测细胞存活率，以观察心肌细胞损伤程度；采用吖啶橙(AO)荧光染色法及流式细胞仪检测心肌细胞凋亡；底物酶解法检测caspase-3活性；免疫组织化学法结合计算机图象分析检测心肌细胞Bcl-2蛋白的表达。结果表明，HPC的早期保护作用可能通过激活G蛋白，进而使PKC活化，K(ATP)通道开放而产生；而HPC延迟保护作用可能与G蛋白-PKC-NF-κB途径合成具有保护性及可分泌性的物质有关。HPC可通过促进抑凋亡蛋白Bcl-2 ＄W14kfqtffbkk的表达、抑制凋亡过程中关键酶caspasel的活性，减少缺氧复氧（H／R）引起的心肌细胞凋亡，其中延迟HPC比早期HPC对凋亡有更强的抑制作用。上述结果为HPC在细胞水平的深入研究提供了依据。 二．一氧化氮模拟HPC早期保护作用 实验采用比色法观察心肌细胞损伤程度；采用 AO荧光染色、TUNEL法、nnexin VFITCrpl双标记流式细胞术检测心肌细胞凋亡；采用激光共聚焦显微术观察NO对细胞内钙的影响；采用比色法检测心肌细胞SOD和MDA活性。结果发现，NO具有模拟IIPC的作用，能抑制心肌细胞坏死和凋亡，其中NO抑制细胞坏死是通过CGMP依赖途径，而PKC的活化和K（ATP）通道的开放可能是其下游重要的信号通路；NO可抑制CAsp朋C上酶的活性而抑制HfL诱导的心肌细胞凋亡；对NO模拟预处理早期保护作用机制的研究发现，NO通过提高心肌细胞抗氧化损伤能力及降低细胞内钙超载，而缓解由于I／R损伤产生的氧矛盾和钙矛盾，从而发挥保护作用。 3．一氧化氮模拟HPC延迟保护作用 实验通过比色法检测心肌细胞＊＊H活性和＊T’T法观察细胞存活率，评价心肌细胞损伤程度：免疫组织化学法结合计算机图象分析检测心肌细胞HSP70蛋白的表达。结果表明，NO通过 CGMP途径诱导心肌细胞预处理延迟保护作用，其作用机制与NO通过激活PKC－W－KB诱导HSP70蛋白表达有关。