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研究背景甲状腺癌是全球范围内发病率增加速度最快的肿瘤,也是最常见的内分泌恶性肿瘤。流行病学资料提示,碘摄入量高的地区甲状腺肿瘤发病率高,碘过量可能是甲状腺肿瘤高发的重要因素。双酚A(bisphenol A, BPA)是一种环境内分泌干扰物,大量资料表明它具有类雌激素活性,可能在甲状腺肿瘤发生过程中起到重要作用。我们先前的研究曾发现一定浓度的碘和BPA可促进人甲状腺癌细胞的增殖。因此,进一步研究碘过量和BPA对动物水平甲状腺肿瘤发生的作用非常必要。目的研究碘过量和双酚A对甲状腺肿瘤发生的影响,探讨甲状腺肿瘤发病机制,为甲状腺肿瘤的防治提供依据,为我国碘盐及双酚A产品的使用提供一定的实验基础。方法4周龄雌性F344大鼠110只,随机分为致癌药物N-亚硝基二异丙醇胺(DHPN)假给药组(DN组,50只)和给药组(DA组,60只)。BPA按体质量(BW)给药,碘化钾按每升饮用水浓度给药,将DN组分为5组：对照组、BPA 250μg/kg(BPA250)组、BPA250μg/kg+KI 1000μg/L (BPA250+KI)组、BPA1000μg/kg(BPA1000)组、BPA1000μg/kg+KI 1000μg/L (BPA1000+KI)组,每组10只。DA组同样分为以上5组,另加KI 1000μg/L (KI)组,共6组,每组10只。饲养16个月后处死,取血测血清FT3、FT4、TSH,取甲状腺称重后固定于福尔马林,常规脱水包埋制作石蜡切片并行HE染色,置于Olympus光学显微镜下由专业病理科医师阅片,统计各组甲状腺肿瘤类型和发生率。采用免疫组化SP法检测细胞增殖指标PCNA在各组大鼠甲状腺组织中的表达,应用Image-pro plus6.0软件结合人工计数方法统计分析。实验数据分析采用SPSS 19.0统计软件。计数资料采用Fisher确切概率法。计量资料以x±s表示,多组比较方差齐时采用方差分析,两两比较采用LSD分析,t检验；方差不齐时采用非参数检验。P<0.05时差异有统计学意义。结果1.大鼠一般状况DN组：大鼠摄食量及体重增加,反应灵敏,自主活动多,体毛浓密光滑,外阴周围干燥,大便呈颗粒状。DA组：大鼠逐渐出现体重增加较缓慢,摄食减少,精神萎靡,自主活动少,多卧位,体毛明显脱落、干枯暗黄,腹部膨隆,外阴周围有湿毛,多稀便。2.大鼠体质量DA组对照组大鼠的平均体质量小于DN组对照组(P<0.05)。DN组和DA组其余组间平均体质量差异无统计学意义(p>0.05)。3.大鼠甲状腺相对质量(mg/100gBW)DN组间差异无统计学意义(P>0.05)。DA组中：KI组甲状腺相对质量最大,对照组最小,差异具有统计学意义(P<0.05)：仅给予双酚A组甲状腺相对质量与对照组无差别(P>0.05)；同时给予BPA和KI组中,BPA250+KI组甲状腺相对质量大于对照组(P<0.05),BPA1000+KI组甲状腺相对质量较对照组无差别(P>0.05)。4.大鼠甲状腺肿瘤4.1 大鼠甲状腺肿瘤发生率DN组中,BPA250+KI组和BPA1000+KI组分别有1例甲状腺肿瘤出现；DA组中,仅BPA250组无甲状腺肿瘤发生,其余各组均有甲状腺肿瘤出现。DA组较DN组肿瘤发生率增加(P<0.05)。DA组中,BPA250+KI组甲状腺肿瘤发生率最高(50%),BPA1000+KI组甲状腺肿瘤发生率(20%)与对照组无差别(P>0.05)。4.2大鼠甲状腺肿瘤类型DA组中,仅KI组1例为甲状腺良性肿瘤(滤泡性腺瘤),其余肿瘤均为恶性肿瘤。所有恶性肿瘤类型中,仅DA组的BPA1000+KI组2个肿瘤类型分别为低分化癌、髓样癌,其余均为乳头状癌。5.大鼠血FT3、FT4和TSH水平5.1单独加碘组与对照组相比：FT3、FT4两组并无明显差异,但DA组KI组TSH水平较DA组对照组明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。5.2单独添加BPA组与对照组相比：FT3及TSH组间均无明显差异。DN组BPA1000组较对照组FT4水平明显升高,其余各组FT4水平与对照组比较差异不明显。5.3同时添加BPA和过量碘组与对照组相比：DA组BPA250+KI组和BPA1000+KI组FT3.FT4均较对照组略高,但差异无统计学意义。同时添加BPA和KI组TSH均比对照组略低,但差异无统计学意义。6.大鼠甲状腺PCNA免疫组化结果6.1大鼠甲状腺PCNA免疫组化阳性率各组间差异并无统计学意义(P>0.05)。阳性率最高者为DA组BPA250+KI组(90.00%),这与肿瘤发生率在该组最高是一致的。6.2大鼠甲状腺PCNA免疫组化评分组间差异有统计学意义。评分最高为DA组BPA250+KI组,与DA组对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)；DA组KI组评分高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论1.DHPN能够对大鼠的生长发育及生命活动产生不利的影响,并具有促进甲状腺肿瘤发生的作用,是大鼠甲状腺肿瘤模型的基础用药。2.单独碘过量具有促进大鼠甲状腺组织增生的作用,但并未见促进甲状腺肿瘤的发生。3.单独BPA暴露促进甲状腺组织增生或甲状腺肿瘤发生的作用不明显,有待进一步研究。4.在DHPN预处理条件下,一定浓度的BPA与过量碘协同作用可促进大鼠甲状腺组织的增生。5.单独碘过量可以引起TSH水平升高,提示日常生活中过量碘摄入可能引起TSH升高。BPA单独作用对甲状腺功能影响不明显。而同时给予BPA和过量碘可能引起TSH水平的降低。6.甲状腺肿瘤的发生可能不是单一因素作用的结果,过量碘和BPA两者共同作用可能促进甲状腺肿瘤发生。