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目的Gypenoside L和gypenoside LI是壮药国虾薄(绞股蓝)中的皂苷类化合物。本论文旨在制备gypenoside L和gypenoside LI这两个化合物,筛选二者对不同癌细胞的抗癌活性,并研究其对癌细胞的作用机制。方法1.用液-液萃取、硅胶柱色谱、快速制备色谱和半制备HPLC等方法对热处理国虾薄总提物进行分离、纯化,用UV、ESI-MS、NMR等数据对所分离得到的化合物进行结构鉴定。2.CCK 8法检测绞股蓝皂苷gypenoside L和gypenoside LI对人非小细胞肺癌A549细胞、人肝癌HepG2细胞、人食管癌EC-109细胞以及人前列腺癌PC-3细胞增殖的抑制作用,计算其半数抑制浓度IC50值,比较不同构型的同分异构体gypenoside L和gypenoside LI对癌细胞的影响。3.CCK 8 法检测 gypenoside L 和 gypenoside LI 对 A549 细胞增殖抑制活性与作用时间及作用剂量的关系;比较gypenoside L和gypenoside LI与阳性对照药人参皂苷Rg3对A549细胞增殖的抑制作用。4.用 PI/RNase 染色、Annexin V-FITC/PI双染、JC-1 及 DCFH-DA染色法及流式细胞术检测gypenoside L和gypenoside LI对A549细胞周期时相分布、细胞凋亡的影响。5.通过划痕实验和 Transwell 检测 gypenoside L 和 gypenoside LI对A549细胞迁移和侵袭能力的影响。6.Western Blot方法从蛋白水平上验证gypenoside L和gypenoside LI对A549细胞凋亡及迁移、侵袭的影响。结果1.从热处理国虾薄80%乙醇总提物中分离得到绞股蓝皂苷gypenoside L(2.2 g)和 gypenoside LI(0.9 g),纯度达到 98%以上。2.Gypenoside L 和 gypenoside LI 对 A549 细胞、HepG2 细胞、EC-109细胞以及PC-3细胞增殖均呈现浓度依赖性抑制关系。作用24 h 时,gypenoside L 的 IC50值依次为 21.09 ± 3.60、28.31 ± 1.48、78.70士 3.06 和 96.16 ± 2.43 μg/mL,gypenoside LI 的 IC50 值依次为 17.09 ±0.63、17.70 ±1.15、19.05 ±2.82 和 46.03 ±6.54 μg/mL。3.Gypenoside L和gypenoside LI对A549细胞增殖抑制作用呈作用剂量及作用时间依赖关系;且在作用时间为24 h,浓度为30 μg/mL时,gypenoside L和gypenoside LI比人参皂苷Rg3对A549增殖的抑制率要高。4.经 24 μg/mL gypenoside L 处理后,G0/G1 期 A549 细胞的比例由(66.42 ± 0.15)%升高至(76.23 ± 1.41)%;A549 细胞凋亡率由(0.57 ± 0.18)%增加到(24.62 土 0.70)%;线粒体膜电势去极化明显,红绿荧光相对比例由(15.44 ± 2.29)%下降到(4.09 ± 0.23)%;细胞内活性氧浓度明显增加,平均荧光强度由14.3 ± 0.14增加到142.5± 4.03。用 17 μg/mL gypenoside LI 处理后,G2/M 期细胞比例由(6.9± 0.32)%升高至(25.83 ± 1.63)%。;A549 细胞凋亡率由(0.57 ±0.18)%增加到(22.44 ± 0.71)%;线粒体膜电势去极化明显,红绿荧光相对比例由(15.44 ± 2.29)%下降到(4.43 土 0.02)%;细胞内活性氧浓度明显增加,平均荧光强度由14.3 ± 0.14增加到152.0 ±5.59。5·用 20 μg/mL gypenoside L 和 15 μg/mL gypenoside LI 处理后A549细胞的划痕愈合率分别比对照组降低了 30.45%和19.87%,细胞侵袭率分别比对照组降低了 39.03%和51.22%。6.经低、中、高剂量组的gypenosideL和gypenoside LI处理后,A549细胞内IL-24蛋白表达呈上升趋势,MMP-2和MMP-9蛋白表达明显下降。结论1.从国虾薄热处理产物中得到大量高纯度的C20位为R构型的gypenoside L 和 C20 位为 S 构型的 gypenoside LI。2.通过CCK 8法对人的非小细胞肺癌A549、肝癌HepG2、食管癌EC-109、前列腺癌PC-3细胞进行活性筛选,发现gypenosideL和gypenoside LI对A549细胞和HepG2细胞的抑制作用较强,而对PC-3细胞则表现出较弱的抑制作用;Gypenoside LI对EC-109细胞的抑制活性比gypenoside L大。3.Gypenoside L和gypenoside LI对A549细胞的可能作用机制如下:① Gypenoside L 将 A549 细胞阻滞于 G0/G1 期,而 gypenoside LI将A549细胞阻滞于G2/M期。②二者均能降低A549细胞线粒体膜电位,增加细胞内活性氧的浓度,说明gypenoside L和gypenoside LI可能通过线粒体信号介导的途径诱导A549细胞凋亡。③通过降低划痕愈合率、侵袭率及下调MMP-2和MMP-9蛋白表达说明gypenoside L和gypenoside LI能够抑制A549细胞的迁移和侵袭。④二者均能上调A549细胞IL-24蛋白的表达,说明二者可能通过IL-24相关途径抑制A549细胞增殖、诱导细胞凋亡、抑制细胞迁移及侵袭。