【摘 要】
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第一部分:小鼠Kupffer细胞、肝窦内皮细胞分离、纯化、培养和鉴定.目的:建立简便、有效和稳定的大鼠肝Kupffer细胞(Kupffercells,KC)和肝窦内皮细胞(sinusoidal endothelial
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第一部分:小鼠Kupffer细胞、肝窦内皮细胞分离、纯化、培养和鉴定.目的:建立简便、有效和稳定的大鼠肝Kupffer细胞(Kupffercells,KC)和肝窦内皮细胞(sinusoidal endothelial cells,SEC)分离、纯化和培养方法.方法:采用胶原酶原位灌注消化干组织;percoll不连续密度梯度离心;选择性贴壁纯化;经免疫组化和扫描电镜鉴定.结果:最终获得小鼠肝Kupffer细胞和SEC产量分别为2.0±0.4*10<6>/肝,1.1±0.6*106/肝;纯度分别为>90％,>75％,细胞活性均大于95％.第二部分:小鼠肝内源性损伤下TLRs在Kupfier细胞、肝窦内皮细胞中的表达.目的:观察在小鼠内源性损伤模型下肝脏Kupffer细胞和肝窦内皮细胞表面Toll样受体(Toll Like Receptors,TLRs)蛋白及mRNA表达.方法:实验组建立肝部分缺血/再灌注模型,对照组进行假手术,采用原位灌注消化法分离并纯化Kupffer细胞和肝窦内皮细胞,采用间接免疫荧光技术即大鼠抗小鼠TLR<,2>IgG和异硫氰酸荧光素(FITC)的二抗进行染色,流式细胞仪(FCM)测定阳性细胞数,并用实时定量PCR(Real-Time RT-PCR)两种细胞中TLR<,2>mRNA含量.结论:在肝缺血/再灌注损伤中,小鼠肝Kupffer细胞TLR<,2>在蛋白质和核酸水平表达明显增高.
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