构建基于核酸适体的新型探针用于食品中抗生素快速筛查

来源 :宁波大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:kinglesssss
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
抗生素作为一种治疗细菌感染的特效药被广泛应用于畜牧业当中,然而其过量和不恰当的使用导致了它们在动物源食品中的残留,经过食物链循环放大最终进入人体,长时间累积会对人体造成很大的伤害。因此,对于食品中的抗生素检测显得尤为重要。然而,在实际样品中,抗生素残留一般都是痕量级别(ng/g),种类繁多,而且样品基质复杂,同时存在大量结构类似物的干扰,这些都为抗生物的准确检测带来了困难。因此,需要开发一些超灵敏、特异性强和可同时检测多种抗生素的方法。在本文中,我们构建了一系列基于核酸适体功能化的纳米探针,结合搅拌棒萃取等技术和离子选择电极、色谱、电分析法等,开发了多种超灵敏、高特异性的抗生素检测方法,实现了牛奶和鱼肉中的氯霉素、卡那霉素、氟甲砜霉素和卡那霉素的同时检测。本研究主要从如下几个方面展开:1.构建基于适体功能化的纳米金属-有机框架(NMOFs)探针,结合核酸酶的循环放大策略用于食品中多种抗生素的同时检测。构建了一种基于核酸适体功能化的纳米金属-有机框架(NMOFs)探针结合核酸外切酶和内切酶辅助的双重信号放大的电化学适体传感器用于食品中卡那霉素和氯霉素的同时检测。首先,合成了一种亲水性的锆基金属-有机框架纳米材料(UIO-66),它的升级版-多级孔洞的UIO-66(HP-UIO-66)用以负载两种电活性物质(亚甲基蓝:MB;二茂铁:Fc)构建两种信号标签,另一方面合成了金纳米粒子标记的酶切探针用以信号的转换。在pH、温度和反应时间等最优的条件下,检测卡那霉素和氯霉素的检测限分别为35 fM和21 fM,并且有一个较宽的线性范围(1×10-450 nM)。这种双重循环的放大策略具有较高的选择性和灵敏性,并且成功的应用于实际样品的检测。2.构建基于适体功能化的磁珠探针,结合HPLC-DAD方法对于食品中酰胺醇类抗生素的特异性富集与同时检测。开发了一种新颖的适体功能化磁性纳米探针结合磁性固相萃取用于食品基质中三种酰胺醇类抗生素(氯霉素、甲砜霉素和氟甲砜霉素)的特异性富集,并结合高效液相色谱-光电二极管阵列检测器(HPLC-DAD)的同时检测。该适体功能化的磁性探针可以特异性的吸附三种酰胺醇类抗生素,对于氯霉素、甲砜霉素和氟甲砜霉素的饱和吸附容量分别为2.82,2.56,2.72μg/g。之后,利用pH为8.5(0.1 M)的Tris-HCl溶液进行洗脱,进样到HPLC-DAD。我们对萃取温度、萃取/洗脱pH、时间等条件都进行了优化。在优化的条件下,三种抗生素的检测限为0.12-0.17ng/mL,线性范围为220 ng/mL。该吸附剂具有很好的稳定性,在使用了60次之后仍然具有80%的回收率。该方法具有较高的选择性和高的吸附容量,并且分离简单快速。此外,该方法几乎不使用有机溶剂,较为环保。更换其他的核酸适体,也可以拓展为其他有机污染物的检测,是一种较为通用的检测平台。3.构建基于适体标记的纳米MOF探针,结合氟离子选择电极用于牛奶中卡那霉素的现场检。在本研究中,采用氟离子选择性电极(FSE),结合纳米金属有机框架(NMOF)标签和双棒辅助支点取代目标物循环放大策略,建立了一种基于氟离子选择电极适体传感器用于食品基质中卡那霉素的快速检测方法。在体系温度和反应时间等最优条件下,卡那霉素的检测限为纳摩尔级别,但是具有很好的特异性,我们对此研究还需进一步的探索,以提高其检测灵敏度。这种基于适体功能化的纳米MOF探针结合氟离子适体传感器检测系统具有高度选择特异性。最重要的是,利用氟离子作为信号源物质和氟离子选择电极的作为检测手段,构建信号标签拟实现抗生素的检测。这一思路具有很好的创新性,并成功地拓宽了氟粒子选择电极的应用领域。
其他文献
本文的目的是通过对比新三板地热能源的9家企业盈利能力不同,对盈利能力就较强的“沃特能源”的企业进行深入分析,研究总结其利用新三板资本市场实现公司盈利能力快速增长的
一方面是净水机普及率不足5%,需求急速升温;另一方面则是由于国家标准有所缺失,净水行业良莠不齐。家用净水机能否成为饮用水安全的最后一道“防线”?$$ 自来水、桶装水问题频
报纸
本文针对船用往复泵,在AutoCAD 2000平台上开发了一套以智能设计方法为支撑理念的往复泵CAD系统——SPCAD。按系统的主要功能实现模块划分,该系统可分为:总体设计模块、主要零部
对于经营非寿险业务的保险公司来说,准备金是负债表上金额最大的负债项目。而未决赔款准备金又是非寿险准备金中最重要的一部分,所以选择合适的未决赔款金估计方法极为重要。
多输入多输出(multiple input multiple output,MIMO)技术在发射端和接收端均设置多根天线,而数字波束形成(digital beamforming,DBF)技术是将多个天线单元中的发射相同数据的天线等效成一根天线的波束形成技术,这两者都是推动现代移动通信向前大步发展的重要技术。本文提出了用线阵或面阵等效为MIMO系统中单根天线的创新思路,结合数字波束形成技术,能有效减
歌剧是西方舞台上的一门综合性的表演艺术,自二十世纪初传入中国以来,以民族特色为主的中国歌剧作品越来越多。早在二十世纪四十年代,当时的文艺工作者主动将歌剧这种艺术形式与中国传统文化相结合,与社会生活相结合,创作出一部极具民族特色的民族新歌剧《白毛女》,此剧一经传唱便经久不衰,最终成为那个时代的巅峰佳作,在中国民族歌剧的发展史上具有里程碑式的重要意义,同时也为后世的创作奠定了坚实的基础。经过一个世纪的
针对目前专用钻床在生产实践中的广泛使用,设计一种使用PLC控制系统,将钻床的生产工艺流程进行改造。该系统中使用多个顺控状态,用PLC相关指令来处理转移条件,将处理后的状态返回
二十多年过去,“半路出家”的胡立俭“治企如治人”,不仅成功实现了从医生到企业家的转型,更带领中鼎国际从萍乡矿业集团的一个仅有11名员工的“出国办公室”,成长为全球最大
“孝道”文化是中国传统优秀文化的重要组成部分,中国“孝道”文化的源头可以追溯到殷商时期,后经过儒家文化发扬光大。“孝道”被认为是在封建时期约束国家民众的重要道德准则之一。本研究对象为欧美来华留学生,通过分析目前欧美来华留学生对中国传统“孝道”文化认同度,探究如何更有效地让留学生提高对中国传统“孝道”文化的认同度,更好地了解和认识中国传统的“孝道”观念,更好地消除跨文化交际过程中的文化差异。本文首先
如何提高机体对寒冷环境的适应能力,是多年来军事医学领域里亟待解决的一个问题。尽管许多学者从不同侧面对这个问题进行了研究,但进展不大。动物与人类冷适应代谢调节机制尤其