【摘 要】
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杆状病毒区别于其它病毒的一个重要的特点是在其生活史中具有两种不同的病毒形态:出芽型病毒粒子(budded virus, BV)和包埋型病毒粒子(occlusion derived virus, ODV)。这两
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杆状病毒区别于其它病毒的一个重要的特点是在其生活史中具有两种不同的病毒形态:出芽型病毒粒子(budded virus, BV)和包埋型病毒粒子(occlusion derived virus, ODV)。这两种病毒粒子具有相同的核衣壳,但囊膜组成不同,这种差异赋予了BV和ODV具有不同的感染机制,发挥不同的功能。BV是进行组织和细胞之间感染的病毒形式,膜融合蛋白在感染过程中发挥重要作用;而ODV主要参与口服感染,目前为止,已经鉴定了四种与口服感染相关的基因( pif )。本文以棉铃虫核多角体病毒( Helicoverpa armigera single nucleopolyhedrovirus, HaSNPV)为研究对象,研究发现ODV同样能感染体外培养的昆虫细胞,并且感染效率受pH的影响;中和试验发现病毒pif基因(p74, pif-1, pif-2和pif-3)决定了HaSNPV ODV感染体外培养细胞的能力。另外,构建了重组棉铃虫核多角体病毒(vHa/lacZ),通过报告基因hsp70/lacZ可以在感染棉铃虫幼虫后经过解剖染色观察到病毒感染的进程,可用于进一步研究棉铃虫核多角体病毒的发病机理。论文第一章综述了杆状病毒的基本结构特点、感染周期、感染途径、感染后的病理变化以及主要结构基因与功能,其中着重介绍了杆状病毒口服感染的相关基因。另外,还介绍了杆状病毒作为真核表达系统的应用,以及在生物防治与基因治疗等方面的应用。第二章介绍了HaSNPV的包埋型病毒粒子感染体外培养的Hz-AM1细胞的研究,阐明了ODV可以感染体外培养的昆虫细胞,并且感染效率受pH值的影响,最高的感染效率在pH 8.0左右,当pH>8.0时感染效率逐渐降低。随后克隆并表达了p74和Ha111基因片段,制备了抗体,中和实验表明,HaSNPV p74, pif-1, pif-2和pif-3特异性的抗体单独均能中和HaSNPV ODV感染HzAM1细胞的能力,但仅在使用四种抗体时才表现协同作用,该结果说明口服感染相关基因(pif)同样参与了ODV感染体外培养的细胞。论文第三章介绍了重组杆状病毒vHa/lacZ的构建,并通过解剖染病幼虫初步研究了棉铃虫核多角体病毒的发病进程。
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