该课题以临床常用的非甾体解热镇痛药酮洛芬为模型药物，合成一系列酯类前体药物，从离体活性皮肤、皮肤细胞及在体皮肤三方面进行经皮吸收过程中皮肤生物转化的深入研究，并从mRNA水平揭示皮肤羧酸酯酶代谢的分子机理.通过该课题的研究，可为手性药物开发和前体药物透皮吸收制剂的研制提供理论指导和技术借鉴.该文建立酮洛芬、酮洛芬甲酯、酮洛芬乙酯、酮洛芬异丙酯的反相高效液相色谱测定方法，具有前体药物和代谢物不经分离直接测定、标准曲线线性良好、方法回收率和精密度都符合体内外经皮渗透和代谢实验测定需要等特点.采用AGP手性柱建立酮洛芬对映体的反相高效液相色谱拆分、测定方法，标准曲线线性良好，皮肤蛋白等杂质不干扰测定，方法回收率和精密度达到体外经皮渗透和代谢实验的分析要求.采用离体活性皮肤的表皮匀浆进行水浴温孵实验，考察酮洛芬前体药物的皮肤代谢特征.人体表皮与不同种类动物表皮的酯酶代谢能力相差显著（P＜0.05），按蛋白含量校正它们的代谢能力依次为SD大鼠表皮＞长大二元杂交幼猪表皮＞成人包皮的表皮＞新西兰家兔表皮＞婴儿表皮.人体表皮代谢产物中以R-酮洛芬为主，幼猪和家兔表皮代谢产物中也以R-酮洛芬占优势，但SD大鼠表皮匀浆代谢产物中酮洛芬对映体的浓度未见差异（P＞0.05），说明不同种类动物表皮与人体表皮酯酶代谢的能力及选择性不同.采用外科手术和酶消化等方法体外分离皮肤，以水平式（两室）扩散池进行酮洛芬和前体药物透过全皮、除角质层皮肤和真皮的离体渗透代谢实验.在经离体裸小鼠全皮和真皮的渗透代谢实验中，酮洛芬前体药物经全皮渗透代谢的稳态速率显著大于经真皮渗透代谢的稳态速率（P＜0.05），酮洛芬前体药物经皮渗透代谢实验结束后皮肤中的残留总量显著大于酮洛芬经皮渗透实验结束后皮肤中的残留量（P＜0.05），说明裸小鼠的表皮是酯酶代谢的主要部位，而酮洛芬前体药物有助于增加皮肤局部的药物积累.在经离体猴全皮、除角质层皮肤及真皮的渗透代谢实验中，酮洛芬前体药物经全皮渗透代谢的稳态速率小于除角质层皮肤（P＜0.05），而实验结束后皮肤中残留药物的总量大于除角质层皮肤（P＜0.05），说明角质层是经皮吸收的屏障而不是皮肤代谢的部位，且能够贮存很多药物;酮洛芬前体药物经真皮渗透代谢的稳态速率小于全皮和除角质层皮肤（P＜0.05），但相对较厚的猴真皮也具有相当大的酯酶代谢能力.采用RT-PCR方法，以人肝L02细胞株为阳性对照，首次研究皮肤羧酸酯酶的表达特征.PCR产物包括全部的表达羧酸酯酶活性位点的序列，说明该实验设计引物正确、RT-PCR方法可靠，这为进一步研究人体其它器官或组织中羧酸酯酶的表达提供了良好借鉴.皮肤组织、表皮角质形成细胞、真皮成纤维细胞和HaCaT细胞系中都有人肝羧酸酯酶-2的强表达，而人肝羧酸酯酶-1在它们中的表达未被检测到，说明人肝羧酸酯酶-2对酮洛芬前体药物的水解有选择性，这为广大经皮吸收研究人员合成和筛选前体药物以改善药物经皮吸收特性的研究提供了理论依据.在以后的实验中我们将进一步利用分子生物学的有关技术识别皮肤组织中的药物代谢酶，并在体外表达重组蛋白质后鉴定其药理作用，这种方法为深入研究各种皮肤代谢酶的结构和功能及选择理想的经皮吸收前体药物提供了良好的试验模型和理论基础.