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我们的前期研究发现紫杉醇能有效提高机体对模式抗原卵清白蛋白(OVA)的特异性体液免疫和细胞免疫应答。多西紫杉醇作为紫杉醇的衍生物,具有更好的水溶性和生物学活性。因此,用多西紫杉醇作为疫苗佐剂具有优越性。本研究以H1N1流感病毒裂解疫苗为抗原,小鼠为实验动物评价多西紫杉醇的佐剂活性,并初步探讨其作用机理。1.多西紫杉醇通过皮下注射途径免疫对H1N1流感病毒裂解疫苗的佐剂作用。将72只雌性Balb/c小鼠随机分成9组(n=8),分别为生理盐水组、H1N1抗原组(10ng和100ng HA)、10ng H1N1抗原联合25、50、100和200μg多西紫杉醇佐剂组以及200μg铝胶佐剂组和100μg多西紫杉醇单独免疫组。所有小鼠间隔3周皮下免疫两次,二免后两周用间接ELISA方法测定血清特异性IgG、IgG亚类和总IgE,以及HI效价MTT法测定脾淋巴细胞转化水平；real-time PCR法测定HA刺激后的脾淋巴细胞内IFN-γ、1L-12、IL-4、IL-10、T-bet和GATA-3mRNA相对表达水平。结果表明多西紫杉醇能显著促进小鼠特异性Th1/Th2型免疫反应。当10ng抗原与多西紫杉醇联合免疫时,所诱导的IgG、IgG亚类和HI效价与100ng HA免疫组水平相当；多西紫杉醇增强了脾淋巴细胞对HA抗原、ConA (?)]LPS的刺激反应性,上调细胞因子(IFN-γ、IL-12、IL-4、IL-10)和转录因子(T-bet、GATA-3) mRNA表达。另外,多西紫杉醇不会促进IgE的产生,而铝胶佐剂则显著高了IgE的水平。2.多西紫杉醇通过黏膜免疫途径对H1N1流感病毒裂解疫苗的佐剂作用。将40只雌性Balb/c小鼠随机分成5组(n=8),分别为生理盐水组、2μgH1N1组、2μgH1N1联合100μg多西紫杉醇佐剂组、2μgH1N1联合5μg rCTB组以及100μg多西紫杉醇单独免疫组,各组小鼠间隔2周滴鼻免疫两次,二免后2周收集肠道组织、血清和黏膜冲洗液等样品,分别测定系统免疫和黏膜免疫相关体液免疫和细胞免疫指标。结果表明,多西紫杉醇与H1N1流感疫苗混合后免疫小鼠能使动物的的全身特异性免疫反应(血清IgG、IgA、IgG亚类、HI抗体滴度)和局部黏膜免疫反应(鼻、支气管黏膜冲洗液sIgA,十二指肠黏膜IgA+细胞、肺组织[FN-γ、IL-12、IL-4和IL-10mRNA表达、小肠上皮内淋巴细胞数)显著提高。另外,含多西紫杉醇的疫苗免疫小鼠后能使小鼠脾淋巴细胞对ConA、LPS和HA刺激反应升高。3.为探讨多西紫杉醇佐剂作用机制,分别从多西紫杉醇对巨噬细胞溶酶体、共刺激分子、细胞因子表达谱分析、NF-κB活化、基因调节功能microRNAs的表达以及Hsp90表达等方面的影响进行分析。0.01μM多西紫杉醇刺激巨噬细胞12h后胞内溶酶体数量显著增加；巨噬细胞CD80/CD86mRNA表达水平随多西紫杉醇刺激时间的延长而逐渐升高；多西紫杉醇诱导巨噬细胞分泌高水平的1L-13、IL-22、IL-2、IL-10、TNF-α、IL-4(?)IL-17；低剂量多西紫杉醇能在一定程度上激活NF-κB; miR-155、miR-150和miR-146a在多西紫杉醇刺激3h后出现显著上调表达；体内外试验均显示多西紫杉醇能诱导Hsp90表达增加。研究结果提示,多西紫杉醇很可能是通过增强抗原加工提呈途径而发挥其佐剂活性,同时多西紫杉醇所诱导的细胞因子及Hsp90在激发全身免疫应答过程中发挥重要作用,而这些效应的诱导与NF-KB信号通路的激活有关,部分microRNAs在基因表达调控中发挥重要作用。综上所述,多西紫杉醇对H1N1流感裂解疫苗皮下免疫和滴鼻免疫具有佐剂作用。多西紫杉醇和流感裂解疫苗混合注射免疫小鼠可显著提高小鼠血清特异性抗体水平,促进脾淋巴细胞产生Thl型(IFN-γ、IL-12)和Th2型(IL-4、IL-10)细胞因子,并且不会导致血清IgE水平上升。多西紫杉醇和流感裂解疫苗混合滴鼻黏膜免疫小鼠可促进全身免疫反应和局部黏膜免疫反应,提高了血清IgG、IgA、IgG亚类、HI效价显著升高,同时提高了鼻支气管黏膜冲洗液中sIgA水平、十二指肠黏膜IgA+细胞数量、肺组织中IFN-γ、IL-12、IL-4和IL-10mRNA的表达、小肠上皮内淋巴细胞数量。体外试验表明,多西紫杉醇的佐剂作用和抗原提呈细胞中NF-KB信号通路的激活有关,miR-155、miR-150和(?)miR-146a参与了前炎性细胞因子的表达调控。