目的: NIS基因转染非甲状腺肿瘤介导放射性核素内放射治疗成为肿瘤基因治疗的又一研究方向。尽管转染了NIS基因的肿瘤细胞或病灶,均能迅速大量摄取放射性碘,但碘在细胞或病灶内停留时间短,疗效不理想。我们利用腺病毒载体将NIS和TPO基因联合转染肝癌细胞,试图延长放射性碘在转染细胞内的储留时间,达到提高疗效的目的。 方法: 1.用RT-PCR方法从Graves’甲亢病人甲状腺组织中扩增出hNIS和hTPO基因,亚克隆到质粒载体,构建成pGEM-Teasy-NIS重组质粒和PBK-CMV-TPO重组质粒,通过酶切和DNA序列分析进行鉴定。 2.将hNIS和hTPO基因分别克隆到腺病毒AdEasier系统的穿梭质粒pAdTrack-CMV上,通过在大肠杆菌BJ51 83内同骨架质粒pAdEasy-1同源重组、并在293细胞中包装、扩增,纯化、构建携带hNIS和hTPO的重组腺病毒AdNIS和AdTPO,测定病毒滴度。Western-Blotting检测重组腺病毒AdNIS和AdTPO的表达。 3.AdNIS单独转染,AdNIS和AdTPO联合转染肝癌细胞HepG2,确定最适MOI,动态检测¹²⁵I的摄取、观测NaClO₄对碘摄取抑制情况、TCA蛋白沉淀检测碘化蛋白、动态检测碘排泄情况,细胞克隆形成实验评价单独和联合转染¹³¹I细胞毒性作用。