新型纳米生物探针的构建及其应用

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神经系统疾病和肿瘤是当前人类面临的两类重大而又未能攻克的疾病,严重影响着人类的健康和生活质量。纳米科技的发展为这两类疾病的诊疗发展提供了新的契机。本论文围绕神经系统疾病和肿瘤中的两个重要问题:星型胶质细胞对β-淀粉样肽的内化降解过程以及循环肿瘤细胞的快速高灵敏检测,研究新型纳米生物探针的构建及其应用。首先,分别采用物理包覆法,共价偶联法及生物亲和法将淀粉肽(Aβ)结合到量子点(QDs)表面制备纳米生物探针。通过多种手段对这些探针进行了表征,结果证明三种探针均保持了QDs优良的荧光性质也保留了Aβ的生物免疫活性,可进一步应用;其后利用原代培养的星型胶质细胞对三类生物探针进行内化实验,在优化实验条件的基础上,证明了物理包覆法所制得的QDs-Aβ探针对Aβ的入胞事件示踪效果最好,且利用该探针对Aβ“入胞-被降解-降解完毕”的过程进行了初步示踪观察,证明了QDs-Aβ作为该方面研究工具的可行性。其次,以快速、简便且高效地分离并检测循环肿瘤细胞(CTCs)为目标,分别构建基于超顺磁性γ-Fe2O3纳米材料的免疫磁富集探针,以及基于水溶性Zn Se/Zn S QDs的免疫荧光探针,进而将这两类探针联合应用,并采用对Zn2+具有特异性荧光放大信号作用的Fluo Zin-3染料对CTCs进行定量检测。结果表明,利用修饰有Ep CAM抗体的免疫磁球(IMNs)可以特异性捕获乳腺癌细胞MCF-7(104个/m L或1-100个/m L),捕获率达95%以上;通过温和的无铜催化点击化学反应构建的CTCs靶向的免疫荧光探针具有对MCF-7细胞的特异识别能力;通过条件优化后,Fluo Zin-3染料不但可以对经过离子置换的Zn Se/Zn S QDs进行定量检测,而且可以对经免疫磁富集探针分离富集并被Zn Se/Zn S QDs特异性标记的MCF-7细胞进行定量检测,检测的线性范围为100-1000个细胞/m L。这些研究结果可以推动星型胶质细胞内化和降解β-淀粉样肽的过程和机理研究以及循环肿瘤细胞的快速高灵敏检测技术的发展,也将促进纳米生物探针在生物医学领域应用的发展。
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