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发状念珠藻是一种具有极强耐早性的陆生蓝藻,不仅具有较高的营养价值和药用价值,还对维护生态环境有重要意义,近年来关于发状念珠藻的耐旱机理的研究备受关注。本研究采用模拟干旱胁迫的方法处理液体悬浮培养的发状念珠藻,研究干旱胁迫下发状念珠藻生理特性的的变化,并克隆耐旱相关基因,探讨发状念珠藻应对干旱胁迫的响应机制,主要研究内容如下: 首先,探讨干旱胁迫对发状念珠藻生长、抗氧化酶活性及渗透调节物质影响,结果表明在不同浓度PEG-6000胁迫处理后,随着干旱胁迫程度的增加,发状念珠藻的生长受到一定程度的抑制,后期逐渐缓解;叶绿素a含量总体上呈上升趋势;发状念珠藻的超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)、硝酸还原酶(NR)活性均呈现先升后降的趋势,细胞胞外多糖(EPS)和脯氨酸(Pro)、丙二醛(MDA)、可溶性蛋白含量呈增加趋势,但在高浓度的PEG-6000胁迫下,脯氨酸和可溶性蛋白的含量会出现稍许下降。说明发状念珠藻在中度干旱胁迫下能够调动自身的抗氧化酶类以提高其抗氧化能力,消除或减轻活性氧毒害,另一方面,渗透调节物质的累积可维持细胞内渗透平衡,保证细胞内正常的物质代谢,进而表现出缓解干旱胁迫的效果。 其次,采用PCR技术从发状念珠藻细胞中克隆了过氧化物还原酶(Prx)、谷胱甘肽还原酶(Gr)和氧化还原酶(Ox)基因,并运用生物信息学软件对基因序列进行分析。结果表明,发状念珠藻prx基因编码的蛋白是定位在细胞质中的亲水性蛋白,具有信号肽和卷曲螺旋结构,具有较高稳定性;gr编码的蛋白是存在与细胞质中的亲水性跨膜蛋白,不具有卷曲螺旋结构和信号肽,具有较高的稳定性;ox基因编码的蛋白是定位在细胞质中的不稳定蛋白,无跨膜结构域,有卷曲螺旋结构,不分泌信号肽。这一结果为进一步研究耐旱相关基因在发状念珠藻抗逆过程中的机理提供信息参考。 最后,采用实时荧光定量PCR技术检测prx、gr、ox基因表达情况,结果显示干旱胁迫下prx、gr、ox基因均上调表达,说明px、gr、ox基因参与了发状念珠藻干旱胁迫的应答,是发状念珠藻对干旱胁迫的一种抗性反应。