目的：一氧化氮(NO)是一种易扩散的生物活性分子，可以直接与蛋白质巯基反应发生亚硝基化。蛋白巯基亚硝基化(S-nitrosylation)/去亚硝基化(denitrosylation)作为一种可逆性蛋白质翻译后修饰，调节不同的信号转导通路进而影响许多细胞的功能。脑缺血可以引起Procaspase-3的激活，但是Procaspase-3激活的机制是否与其去亚硝基化有关尚待进一步研究。本文采用大鼠四动脉结扎全脑缺血模型，缺血前后给予药物研究Procaspase-3的激活与其去亚硝基化的关系；观察一些抑制去亚硝基化的药物，是否抑制了Procaspase-3的活化，并保护神经元。　　 方法：在大鼠四动脉结扎全脑缺血模型中，采用免疫印迹、免疫组化研究蛋白的表达量的变化，采用生物素转化法研究该蛋白的半胱氨酸毓基亚硝基化水平变化，采用免疫沉淀的方法检测蛋白与蛋白之间的相互作用，采用焦油紫染色、TUNEL染色研究海马CA1区神经元细胞丢失和凋亡。培养SH-SY5Y细胞，利用脂质体转染Fasl和TrxR2的siRNA，采用RT-PCR研究Fasl和TrxR2 mRNA水平的变化，同时检测siRNA对Procaspase-3去亚硝基化和对其激活的影响，通过DAPI染色检测SH-SY5Y细胞神经元凋亡。　　 结果：　　 1．静息状态下Procaspase-3处于亚硝基化状态，脑缺血／再灌注海马CA1区procaspase-3亚硝基化水平降低，即发生了去亚硝基化。脑缺血／再灌注使海马CA1区Procaspase-3水解而使其活化，且去亚硝基化和活化具有时间依赖性。脑缺血／再灌注3h时，Procaspase-3的亚硝基化降低，而再灌注6h时，Procaspase-3水解明显而被激活。说明Procaspase-3的去亚硝基化与其激活相关。　　 2.KA受体亚基GluR6的抑制剂NS102, NMDA受体的抑制剂MK801以及AMPA受体的拮抗剂GYKI152466可以抑制Procaspase-3去亚硝基化。同时可以抑制procaspase-3的降解，从而抑制其活性。　　 3．脑缺血／再灌注激活了Fas受体，为了研究Fas受体是否涉及Procaspase-3分解的机制，给予FasL反义寡核苷酸处理阻断FasL/Fas通路，结果证实FasL反义寡核苷酸抑制Procaspase-3去亚硝基化从而抑制了其活性，说明Fas受体介导了Procaspase-3去亚硝基化以及活化。　　 4．为了研究Trx-TrxR系统是否能影响脑缺血／再灌注引起的Procaspase-3的去亚硝基化和激活，分别给予TrxR的抑制剂（金诺芬）auranofin，以及TrxR2的反义寡核苷酸，均可抑制Procaspase-3的去亚硝基化和激活。结果提示了Trx-TrxR参与了脑缺血／再灌注引起的Procaspase-3去亚硝基化和激活。　　 5．培养SH-SY5Y细胞，分别转染Fasl和TrxR2的siRNA，进行OGD，在体外实验进一步证实FasL介导了Procaspase-3的去亚硝基化及活化，Trx-TrxR参与了脑缺血／再灌注引起的Procaspase-3去亚硝基化和激活。同时DAPI染色证实FasL和TrxR2的siRNA对神经元损伤有保护作用。　　 6．给予外源性NO供体GSNO、SNP对Procaspase-3的亚硝基化水平具有负调节作用，可以抑制Procaspase-3水解而抑制其活化。　　 7．焦油紫染色的结果表明抑制Procaspase-3去亚硝基化和活化具有抗脑缺血／再灌注引起的海马神经元迟发性死亡作用。TUNEL凋亡检测的结果进一步证实了焦油紫染色的结果，表明通过抑制Procaspase-3去亚硝基化和活化可以抗脑缺血／再灌注诱导的海马神经元凋亡。　　 结论：脑缺血／再灌注可以激活NMDA受体，AMPA受体，KA受体而使Procaspase-3去亚硝基化而活化。而激活KA受体，是通过引起的Fasl表达增加和Fas受体的激活，并通过Trx-TrxR系统介导促使Procaspase-3去亚硝基化而使其活化，导致神经元细胞凋亡。抑制Procaspase-3去亚硝基化的药物可以实现神经元保护作用。