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背景:肝纤维化是一种慢性肝脏损伤,其发生发展与慢性乙肝病毒和丙肝病毒感染、酒精性脂肪性肝炎、非酒精性脂肪性肝炎、化学毒性及胆道疾病等有关,而内质网应激的诱发可能在肝纤维化的发生和发展中发挥重要作用。丹酚酸A（Salvianolic acid A,Sal A）是丹参根部主要的水溶性有效成分之一,具有广泛的药理作用,例如抗氧化、抗炎、抗纤维化、抗癌症等。热休克因子1（Heat shock factor1,HSF1）通过诱导热休克基因hsp的表达而在保护细胞免受错误折叠蛋白堆积导致的压力中扮演一个重要的角色,同时调节疾病和衰老。沉默信息调节因子1（Sirtuin1,SIRT1）去乙酰化HSF1能促进其与热休克基因Hsp70的启动子结合,增强HSF1因子的DNA结合活性,提高热休克反应（heatshock response,HSR）,抑制内质网应激。但是SIRT1/HSF1通路调控内质网应激在肝纤维化中的作用,以及丹酚酸A调控该通路对肝纤维化发挥保护作用尚未见报道。目的:探讨丹酚酸A对胆汁淤积性肝纤维化损伤的保护作用及其相关分子机制。首次研究SIRT1/HSF1机制减轻内质网应激在肝纤维化损伤中的作用,揭示肝纤维化损伤疾病发展的机制,为其治疗提供新的靶点。方法:1、丹酚酸A对BDL（Bile duct ligation）诱导的肝纤维化损伤保护作用的研究40只SD（Sprague Dawley）大鼠,雄性,SPF级,体重180~220g,随机分为五组:（A）正常对照组、（B）丹酚酸A正常给药组（20mg/kg）、（C）胆管结扎模型（bile duct ligation,BDL）组、（D）BDL+丹酚酸A（10mg/kg）给药组、（E）BDL+丹酚酸A（20mg/kg）给药组。C、D、E组进行胆管结扎手术,大鼠腹腔内注射戊巴比妥（50 mg/kg）进行麻醉,从腹中线切开后,双重结扎胆总管后,缝合腹部。A、B组进行假手术,仅暴露胆总管后,缝合腹部。D组灌胃给予丹酚酸A水溶液（10mg/kg/day）,B、E组灌胃给予丹酚酸A水溶液20mg/kg/day,给药三周。三周后腹主动脉采集血液,留取肝脏组织标本。检测血清中谷丙氨酸氨基转移酶（Alanine Aminotransferase,ALT）、谷草氨酸氨基转移酶（Aspartate Aminotransferase,AST）、总胆红素（total bilirubin,Tbil）的活性。采用苏木素-伊红染色（hematoxylin-eosin,HE）检查肝脏病理改变。采用Masson染色检测肝脏组织胶原的累积与分布。采用Western blotting法检测肝组织中SIRT1、HSF1、HSP27、P-PERK、PERK、P-IRE1-α、IRE1-α、ATF6、GRP78、α2（I）collagen（COL1A2）、α平滑肌肌动蛋白（Smooth muscle actin-α,α-SMA）的蛋白水平,免疫沉淀法检测乙酰化HSF1蛋白表达水平。2、丹酚酸A对PDGF（platelet-derived growth factor-BB homodimer）诱导的LX-2细胞损伤的保护作用及相关机制研究（1）LX-2细胞分为五组:空白对照组、PDGF-BB组、PDGF-BB+丹酚酸A处理组、PDGF-BB+衣霉素处理组、PDGF-BB+salubrinal处理组。丹酚酸A（25μM）或衣霉素（2.5μg/ml）或salubrinal（30μM）与PDGF-BB（20ng/ml）共同孵育24h后,提取细胞蛋白。Western blotting法检测细胞内GRP78、ATF4、α2（I）collagen（COL1A2）、α平滑肌肌动蛋白（Smooth muscle actin-α,α-SMA）蛋白表达水平。（2）LX-2细胞随机分为四组:阴性对照组（si-control）、阴性对照（si-control）+丹酚酸A给药组、转染SIRT1 si RNA组、转染SIRT1 si RNA+丹酚酸A给药组。SIRT1 si RNA序列转染细胞6h后,丹酚酸A（25μM）与细胞共同孵育24h后,提取细胞蛋白。Western blotting法检测细胞内SIRT1、HSF1的蛋白表达水平,免疫沉淀法检测乙酰化HSF1蛋白表达水平。（3）LX-2细胞分为五组:空白对照组、PDGF-BB组、PDGF-BB+丹酚酸A处理组、PDGF-BB+EX527组、PDGF-BB+EX527+丹酚酸A处理组。EX527（10μM）刺激细胞6h后,丹酚酸A（25μM）、PDGF-BB（20ng/ml）共同孵育24h后,提取细胞蛋白。采用Western blotting法检测SIRT1、HSF1、HSP27、P-PERK、PERK、P-IRE1-α、IRE1-α、ATF6、GRP78、α2（I）collagen（COL1A2）、α平滑肌肌动蛋白（Smooth muscle actin-α,α-SMA）蛋白水平,免疫沉淀法检测乙酰化HSF1蛋白表达水平。（4）LX-2细胞分为五组:空白对照组、PDGF-BB组、转染HSF1 si RNA+PDGF-BB组、转染HSF1质粒+PDGF-BB组、PDGF-BB+丹酚酸A处理组。HSF1 si RNA序列或HSF1质粒转染细胞6h后,PDGF-BB（20ng/ml）与细胞共同孵育24h后,采用Western blotting法检测HSF1、P-PERK、PERK、P-IRE1-α、IRE1-α、ATF6、GRP78、α2（I）collagen（COL1A2）、α平滑肌肌动蛋白（Smooth muscle actin-α,α-SMA）蛋白水平。结果:实验结果表明:BDL诱导的肝纤维化导致血清中ALT、AST水平显著上升,且肝小叶正常结构被破坏,中央静脉缺失,大量胶原纤维增生,而给予丹酚酸A治疗后,上述状况减轻。BDL模型组中P-PERK/PERK、P-IRE-1α/IRE-1α、ATF6、GRP78、α-SMA和COL1A2的蛋白水平显著增加,而丹酚酸A治疗组降低内质网应激和纤维化相关蛋白水平的表达。更重要的是,丹酚酸A显著上调了SIRT1的蛋白表达水平,降低了乙酰化HSF1的蛋白表达水平。细胞实验结果显示,给予内质网应激的抑制剂salubrinal后,GRP78、ATF4、α-SMA和COL1A2的蛋白水平显著减低。体外干扰SIRT1内源性表达或给予SIRT1的特异性抑制剂EX527,药物对SIRT1蛋白表达的上调作用及乙酰化HSF1蛋白表达的抑制作用消失。并且,给予SIRT1的特异性抑制剂EX527,药物对内质网应激和纤维化的抑制作用也消失。进一步探讨研究发现,转染HSF1质粒后,能抑制内质网应激及肝纤维化,而给予丹酚酸A也能达到相同的效果。以上结果表明,丹酚酸A通过SIRT1/HSF1通路抑制内质网应激,进而减轻肝纤维化。结论:1、丹酚酸A对肝纤维化损伤具有保护作用。2、在肝纤维化损伤中,SIRT1通过去乙酰化HSF1抑制内质网应激,进而抑制肝纤维化3、丹酚酸A通过SIRT1/HSF1通路抑制内质网应激,对抗肝纤维化损伤。