论文部分内容阅读
目的：糖尿病肾病是全球终末期肾脏病的最常见病因,严重危害人类的健康。糖尿病肾病的基本病理改变为肾小球肥大、基底膜增厚及系膜基质聚集,最终导致肾小球硬化。近年来,Smads蛋白超家族在肾小球硬化方面的作用受到国内外学者的关注。本实验通过观察Smadl在糖尿病大鼠肾组织中的表达,探讨Smadl与肾小球系膜基质积聚的关系,并通过观察AT1受体拮抗剂对Smadl表达的影响,探讨其在延缓肾脏纤维化中的可能作用机制。方法：随机选取SD大鼠64只,分为对照组16只、糖尿病组24只及用药组24只。使用链脲佐菌素(STZ,55mg／kg)腹腔注射,诱发大鼠糖尿病动物模型,正常对照组大鼠予等量柠檬酸缓冲液腹腔注射。用药组大鼠自第3周起予奥美沙坦(0.6mg／kg)灌胃治疗,其他大鼠给予等量生理盐水灌胃处理。分别于3周、4周、12周及20周处死大鼠,测定糖化血红蛋白、血肌酐及肾重指数,并留取24小时尿量,测定尿肌酐及尿白蛋白,留取肾组织标本送检,分别进行电镜观察,PASM、PAS及Masson染色光镜下病理观察。并采用免疫组织化学、Western blot方法检测肾脏ColⅣ和Smadl蛋白的表达,RT-PCR方法检测肾组织ColⅣ和Smadl mRNA的表达,并采用病理图像分析软件(美国Image-Pro Plus6.0)进行相关性分析。结果：1.随着病程延长,糖尿病组大鼠的糖化血红蛋白(HBAlc)、血肌酐(SCr)、肾重指数、24h尿蛋白均呈上升趋势。其中糖尿病组各时间点的糖化血红蛋白、24小时尿量及24小时尿蛋白较对照组明显升高(p<0.05,p<0.01),示糖尿病动物模型成功。2.免疫组化显示,糖尿病大鼠Smadl主要表达于肾小球系膜区,肾小管略有表达,而对照组表达很少。Western blot结果示3周时糖尿病组Smadl在蛋白水平的表达量较对照组升高16倍(p<0.01),20周时用药组与糖尿病组相比降低8.3倍(p<0.05)。RT-PCR结果显示,20周时用药组大鼠肾组织Smadl的mRNA表达较糖尿病组降低1.7倍(p<0.05)。结果证实,糖尿病大鼠肾组织Smadl表达明显增高,奥美沙坦可下调其表达水平。3.免疫组化显示,对照组肾小球基底膜和系膜区ColⅣ有表达,而糖尿病大鼠表达明显增加,且随着病程延长呈上升趋势。RT-PCR结果显示20周时用药组大鼠肾组织ColⅣ的mRNA表达较糖尿病组降低2.3倍(p<0.05)。4. Western blot及免疫组化还显示,自3周起,糖尿病组大鼠肾组织Smadl在蛋白水平表达较对照组开始升高,此时24小时尿蛋白排泄量也增高。又经病理图像分析软件(美国Image-Pro Plus6.0)结果显示,Smadl蛋白与ColⅣ的表达量显著相关(r=0.68,p<0.01),而尿蛋白量与ColⅣ的相关性相对较弱(r=0.45,p=0.043)。结论：1.糖尿病大鼠肾组织Smadl表达的变化提示,Smadl参与糖尿病肾病的发生发展,且Smadl将可能成为糖尿病肾病早期诊断的参考指标。2.AT1受体拮抗剂可能是通过抑制Smadl信号转导途径延缓肾脏纤维化的进程。