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目的:异形吸虫是一类隶属于异形科的小型人兽共患寄生虫,东南亚地区感染尤为严重,但对其研究较少,缺乏相应的检测标准。本研究通过形态学和分子生物学相结合的方法对广西南宁犬、猫感染异形吸虫成虫及淡水鱼所感染囊蚴进行调查,并对东南亚区域内广泛流行的横川后殖吸虫和扇棘单睾吸虫建立二重PCR检测法。方法:对来源于广西南宁47副猫和40副犬的心、肝、肺脏和小肠等内脏采用蠕虫学完全剖检法进行虫体的收集,鲜活虫体采用10%的福尔马林溶液固定后压片和染色,镜下观察其形态特征;部分虫体保存于70%的酒精中,用于分子鉴定。来源于广西横县135尾淡水鱼样采用压片法活检后再用人工胃液消化法收集囊蚴,初步分类后直接在光学显微镜下观察、拍照和测量。提取成虫和囊蚴的DNA,采用ITS2通用引物进行PCR扩增、测序、人工核对和序列上传,并利用MEGA5.2软件进行多重比较,之后按照邻位相连法构建系统发育树。同时基于Genbank报道的序列以ITS1为标记序列设计扇棘单睾吸虫和横川后殖吸虫的特异性引物,进行单一和多重PCR条件的优化和方法的检验,建立特异性二重PCR检测法。结果:47副猫内脏中共获得6种吸虫,各种吸虫的感染率和感染强度分别是华支睾吸虫:40.4%,200.8;叶形棘隙吸虫:21.3%,55.3;横川后殖吸虫:17.0%,35;扇棘单睾吸虫:6.4%,0.8;钩棘单睾吸虫:5.1%,115.3;心形咽口吸虫:27.7%,189.8。40副犬内脏中共获得5种吸虫,分别是华支睾吸虫、叶形棘隙吸虫、藐小棘隙吸虫、横川后殖吸虫和扇棘单睾吸虫,感染率分别为27.5%、10.0%、10.0%、5.0%和12.5%。135尾淡水鱼中分离到的囊蚴经形态学初步鉴定和序列的PCR测序分析,共鉴定出5种囊蚴,分别为华支睾吸虫囊蚴、次睾属吸虫囊蚴、Holostephanus dubinini囊蚴、外睾吸虫囊蚴、钩棘单睾吸虫囊蚴。所分离到的囊蚴百分比分别为:61.7%、13.4%、5.5%、1.8%和1.8%。此外还有15.8%的未知囊蚴。ITS2序列构建的发育树与形态学鉴定结果一致,棘隙属吸虫和未知囊蚴缺乏相应的序列信息不能进行同源性比对。基于ITS1序列建立了横川后殖吸虫和扇棘单睾吸虫的二重PCR检测方法,检测扇棘单睾吸虫灵敏度为1.235 × 104拷贝/μl,横川后殖吸虫的为1.726 ×103拷贝/μ1,并且与犬、猫和鱼体内常见的寄生虫无交叉反应,特异性良好。结论:本研究结果表明广西犬、猫体内主要流行的异形吸虫为横川后殖吸虫、扇棘单睾吸虫和钩棘单睾吸虫,淡水鱼中仅检测到钩棘单睾吸虫囊蚴。构建的横川后殖吸虫、扇棘单睾吸虫二重PCR特异性好,灵敏度高,适用于临床检测和寄生虫的区系调查。