论文部分内容阅读
目的:研究肝癌患者外周血树突状细胞(Dendritic cell,DC)体外诱导、扩增方法以及生物学特性,进一步在体外制备人自体肝癌细胞裂解物致敏的 DC 瘤苗, 为人自体肝癌细胞裂解物致敏的 DC 瘤苗在临床上的应用提供理论依据。 方法: 1.肝癌患者外周血树突状细胞体外诱导和生物学特性观察 从肝癌患者外周血中分离出单核细胞,在重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)和重组人白细胞介素 4(rhIL-4)的作用下培养 7～14 天诱导扩增出 DC,并通过形态学观察、FACS 分析(检测 DC表面特异性标记 CD1a 及 DC 功能相关分子 HLA-DR、CD40、CD86 的表达)和混合淋巴细胞反应进行鉴定。 2.肝癌细胞裂解物致敏的 DC 瘤苗的制备与鉴定 2.1 从肝癌患者手术切除的肝癌组织中分离制备肝癌细胞及其裂解物。 2.2 取肝癌患者外周血,按前述方法诱导扩增出 DC,经自体肿瘤细胞裂解物致敏,制备肝癌细胞裂解物致敏的 DC 瘤苗。 2.3 通过形态学观察、FACS 分析(检测 DC 表面特异性标记 CD1a 及DC 功能相关分子 HLA-DR、CD40、CD86 的表达)和混合淋巴细胞反应对肝癌细胞裂解物致敏的 DC 瘤苗进行鉴定。 结果: 1.肝癌患者外周血 DC 的鉴定和生物学特性 在细胞因子 rhGM-CSF 和 rhIL- 4 作用下,培养 7～14 天即可诱导出典型的 DC。经光学显微镜观察证实,所诱导的细胞具有典型 DC 的形态学特征;流式细胞仪则表明其表面表达 DC 特异性表面标记 CD1a,同时高表达功能相关分子 HLA-DR,CD40 和 CD86;混合淋巴细胞反应的检测表明,DC 具有较强的刺激同种淋巴细胞反应的能力。 2.肝癌细胞裂解物致敏的 DC 瘤苗的制备与鉴定 2.1 成功从肝癌患者手术切除的肝癌组织中分离制备肝癌细胞及其裂解物。 2.2 成功制备人自体肝癌细胞裂解物致敏的 DC 瘤苗。 2.3 肝癌细胞裂解物致敏 DCs 后其表面 CD1a、CD40、CD86 和 HLA-DR等分子表达较未致敏 DC 均有不同程度进一步上调。并可诱导自体混合淋巴细胞强烈增殖反应,极显著高于未致敏 DC 组,肝癌细胞裂解物组和对照组(P<0.01)。 结论: 1.肝癌患者外周血单核细胞在 GM-CSF 和 IL-4 的诱导下,可以分化为典型的 DC 细胞,并具有较强的抗原提呈功能。 2. 成功制备人自体肝癌细胞裂解物致敏的 DC 瘤苗。