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牙周病是人类牙齿丧失的主要原因之一,牙周组织破坏后常难以修复,因而如何使丧失的牙周膜、牙槽骨和牙骨质协调一致的再生,并重新建立生理性附着关系一直是牙周病研究中的热点。近来的很多研究已经证实,广泛存在于人和动物体内的骨形成蛋白(bone morphogenetic proteins,BMPs)是一种高效的骨诱导活性因子,能促使间充质细胞向软骨和骨分化,刺激特异性组织细胞的增殖和加速骨缺损的早期愈合。 基础和应用研究结果表明,牙周膜缅胞(periodontal ligament cells,PDLC)是具有多向分化功能的群体细胞,是牙周组织再生修复的基础;其中的间充质细胞在适当的环境条件和诱导因子(如BMP)作用下,有向成骨细胞和成牙骨质细胞分化的趋势。据此提出和发展起来的牙周引导组织再生技术(guided tissue regeneration,GTR)能有效地提供和保障PDLC的生长环境,同时减少结合上皮(JE)对牙周组织再生的干扰。 为进一步了解BMP与PDLC之间的相互关系和改良现有的GTR膜,我们应用细胞培养、流式细胞仪和原位杂交等技术观察了BMP对离体培养的PDLC生物学特性的影响;并通过实验动物学和组织病理学方法评估了BMP与GTR技术相结合修复牙周骨缺损的疗效。 第一部分 骨形成蛋白对牙周膜细胞生物学特性的影响 1 在离体培养了PDLC和从小牛长骨中分离提取出bBMP的基础上,用MTT法和酶动力学方法观察了BMP对PDLC增殖和ALPase活性的影响;结果显示在一定范围内,不同剂量的BMP均能促进人牙周膜细胞的增殖和ALP ase活性;而以后者的表现更为明显。 2 为了解PDLC中的BMP存在和表达情况,我们用BMP单克隆抗体以间接免疫荧光结合FCM的技术检测后发现,离体培养的PDLC