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研究目的: 验证HGF对DCs免疫功能的抑制。将含NK4基因的重组腺病毒Ad-NK4转染DCs，观察Ad-NK4逆转HGF对树突状细胞免疫功能抑制，为开发DCs疫苗治疗MM提供新思路和策略。 方法： 取健康志愿者的外周血，密度梯度离心法获取外周血单个核细胞（Peripheral blood mononuclear cells, PBMNCs），采用CD14磁珠分选收获的PNMNCs。收获的CD14+的PBMNCs，用100 ng/ml（终浓度）rhGM-CSF和50 ng/ml(终浓度) rhIL-4诱导分化为DCs。以Ad-NK4和Ad-GFP转染DCs，确定合适的感染复数（multiplicity of infection, MOI），通过流式细胞术、Western Blot和PCR验证Ad-NK4对DC的转染效率。设立4个分组：空白对照组为未转染腺病毒的DCs，不用HGF处理；3个实验组在培养基中加入50 ng/ml（终浓度）HGF，分别为未转染腺病毒的DCs组（HGF组）、转染Ad-GFP的DCs组（HGF+Ad-GFP组）和转染Ad-NK4的DCs组（HGF+Ad-NK4组）3组。收集培养的细胞做以下检测：（1）收集培养至第5天的细胞，即未成熟DCs（immature dendritic cells, imDCs），调节细胞数为2×105/ml与FITC-dextran（1 mg/ml）混匀后在37℃培养箱中培养2 h，PBS洗涤，流式细胞仪检测的dextran阳性的细胞（%），作为DCs吞噬能力的指标；（2）收集imDCs，用流式细胞仪检测表面分子CD209、CD206及 CD16；（3）收集各组imDCs，检测表面分子CD40、CD80和CD86；（4）培养第5天，在培养基中加入TNF-α，至第7天收集细胞，为成熟DCs（mature dendritic cells, mDCs），检测表面分子CD40、CD80和CD86；（5）Transwell细胞迁移实验检测各组imDCs的迁移能力；（6）明胶酶谱检测金属机制蛋白酶MMP2和MMP9活性；（7）Western Blot检测MMP2和MMP9蛋白表达。 结果： （1）PBMNCs经过GM-CSF和IL-4诱导分化后可以获得具有免疫表型特征的DCs，在TNF-α刺激后，DCs在显微镜下可看见明显树突样突起，表现出典型的细胞形态。（2）Ad-NK4对DCs有着较高的感染率，其中合适的感染复数是100 MOI。（3）HGF能够抑制imDCs摄取抗原的能力，HGF组和空白对照组分别为26.50±4.78和72.53±3.42（P<0.01），Ad-NK4能够拮抗HGF对imDCs摄取抗原的能力的抑制，dextran阳性率为70.56±3.46（P<0.05）。（4） HGF能够下调抗原吞噬相关分子CD206（HGF组vs空白对照组：36.43±6.45 vs54.40±8.72，P<0.05）和CD16（HGF组vs空白对照组：24.25±7.56 vs38.03±4.96，P<0.05）的表达率；Ad-NK4能够逆转HGF的作用，CD206和CD16的表达率分别为56.23±4.48（P<0.05）和31.43±3.79（P<0.05）。（5）HGF能够降低mDCs抗原提呈相关分子CD80（HGF组vs空白对照组：40.28±6.52 vs80.48±11.2，P<0.05）及CD86（HGF组vs空白对照组：34.36±7.56 vs76.01±10.23， P<0.05）的表达率，Ad-NK4能够逆转HGF的作用，CD80和CD86分别为78.3±4.48e（P<0.05）和69.43±8.79（P<0.05）。（6）细胞迁移实验提示，HGF能够促进DCs迁移，HGF组和空白对照组迁移细胞数分别为18.49±1.97和20.34±2.13（P<0.05)，但差值很小，实际意义不大。HGF+Ad-NK4组为20.34±2.13，与HGF组比较无显著差异（P>0.05）。（7）明胶酶谱和Western blot结果都提示HGF提高DCs中MMP9的活性，Ad-NK4抑制HGF的作用。 结论： （1） Ad-NK4能够有效感染DCs。 （2） HGF降低imDCs的抗原吞噬能力及抗原吞噬相关分子CD206和CD16的表达，Ad-NK4能够逆转HGF对imDCs吞噬能力的抑制。 （3） HGF能够抑制mDCs抗原提呈相关分子的表达，Ad-NK4能够逆转此抑制作用。 （4） HGF促进imDCs的迁移作用不明显。 （5） HGF能够提高mDCs MMP9的活性，Ad-NK4逆转HGF对MMP9的活化。