骨髓间充质干细胞对光损伤致视网膜色素上皮细胞凋亡的影响

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目的为探讨强光照射对人视网膜色素上皮(human retinal pigment epithelialium,h RPE)细胞凋亡的影响及骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,MSCs)对光损伤h RPE细胞的保护作用。方法采用角蛋白-18(CK-18)免疫组织细胞化学染色鉴定h RPE细胞,以1.5*105细胞量种板,12600±500Lx强度光照2h建立光损伤h RPE细胞体外模型,分别利用MSCs条件培养液体及与MSCs共培养干预光损伤h RPE细胞24h、48h,光镜下观察h RPE细胞形态改变,末端脱氧核苷酸标记法(TUNEL)及流式细胞术检测h RPE细胞凋亡情况,ELISA法检测h RPE细胞上清液LDH水平。结果1.强光照射24h、48h后,倒置相差显微镜下观察见h RPE细胞的数量显著减少,部分细胞体积缩小、核边聚,呈透亮外观,贴壁能力下降,培养液中出现少量细胞碎片。与正常组相比,光损伤组h RPE细胞TUNEL阳性细胞率增加(P<0.05);且光照后24h组与48h组相比,差别具有统计学意义(P<0.05)。流式细胞技术检测结果显示光损伤后的h RPE细胞凋亡率明显增高。2.利用MSCs条件培养液或采用MSCs共培养干预光损伤h RPE细胞24h、48h后发现,相较光损伤组,条件培养液组和共培养组h RPE细胞培养上清液LDH水平及TUNEL阳性细胞率均显著降低(P<0.05)。流式细胞技术检测结果发现,条件培养液组和共培养组的细胞凋亡率明显减少。3.比较干预24h、48h时间点发现,共培养组24h、48h干预时间点较条件培养液组的24h、48h干预时间点的h RPE细胞培养上清液的LDH水平及TUNEL阳性细胞率均显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。流式细胞术检测显示共培养组可更有效降低光损伤所致的h RPE细胞凋亡率。结论强光照射可以引起h RPE细胞凋亡,利用MSCs的条件培养液及MSCs共培养干预光损伤的h RPE细胞,可显著降低强光照射所导致的h RPE细胞凋亡,且共培养具有更加有效的抗光损伤所致h RPE细胞凋亡的作用。
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