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研究目的:肺癌是癌症死亡的主要原因之一,约占全部癌症死亡率的18%。尽管有手术切除、放化疗等治疗方法,但是患者确诊为肺癌时多处于晚期,治疗效果欠佳。中药以其高效、副作用小的独特优势,具有突出的抗癌作用。瑞香素是一种香豆素衍生物,是从瑞香中分离而得,具有抗肿瘤的作用。MAPK、STAT3和NF-κB信号通路与肺癌的发病机制密切相关,本研究借助肺腺癌A549细胞,探讨MAPK、STAT3和NF-κB信号通路在瑞香素抗肿瘤中的作用及其机制,阐明瑞香素对A549细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭的影响。研究结果为瑞香素用于抑制肺腺癌提供新的研究方向及理论依据。研究方法:1.瑞香素对肺腺癌A549细胞中炎性因子的影响A549细胞加入不同浓度的瑞香素（0、5、10μg/mL）和DMSO（瑞香素的溶剂对照）作用24小时后提取蛋白和RNA,通过Western Blot和RT-qPCR技术检测炎性因子IL-18、IL-1β和iNOS的蛋白和mRNA的表达。2.瑞香素对肺腺癌A549细胞中MAPK、STAT3和NF-κB信号通路的影响不同浓度的瑞香素（0、5、10μg/mL）和DMSO作用A549细胞24小时,通过Western Blot实验技术检测MAPK信号通路相关分子（JNK、ERK1/2和p38以及其磷酸化）的蛋白表达水平,检测STAT3信号通路相关分子（JAK2及其磷酸化和STAT3及其磷酸化）的蛋白表达水平,检测NF-κB信号通路相关分子（NF-κB p105、NF-κB p65、IκB-α以及其磷酸化）的蛋白表达水平,以此确定瑞香素的最佳使用浓度。3.瑞香素对肺腺癌A549细胞肿瘤生物学行为的影响1)将DMSO和0、10μg/mL瑞香素加入A549细胞分别作用24h、48h、72h后通过CCK8检测A549细胞增殖的情况。2)将DMSO和0、10μg/mL瑞香素加入A549细胞,通过平板克隆形成的方法检测瑞香素对细胞克隆形成的影响。3)将DMSO和0、10μg/mL瑞香素加入A549细胞分别作用0h、24h、48h、72h后通过细胞划痕实验检测瑞香素对A549细胞迁移的影响。4)将DMSO和0、10μg/mL瑞香素加入A549细胞,通过Transwell细胞侵袭实验检测瑞香素对A549细胞侵袭的影响。4.瑞香素和JNK抑制剂对肺腺癌A549细胞STAT3和NF-κB通路的影响A549细胞加入JNK抑制剂预处理1h,再按实验分组加入不同浓度的瑞香素（0、10μg/mL）和DMSO（瑞香素的溶剂对照）作用24小时后提取蛋白通过Western Blot技术检测JNK及其磷酸化的蛋白表达水平,检测STAT3通路和NF-κB通路相关分子的蛋白表达水平。研究结果:1)与对照组相比,DMSO组的IL-18、iNOS和IL-1β的蛋白和mRNA的表达均无显著性差异。2)与DMSO组相比,Daph组中IL-18（P＜0.01）的蛋白和mRNA的表达均显著下降,IL-1β（P＜0.05）和iNOS（P＜0.05）的mRNA表达下降,但是蛋白表达未见显著差异。3)与对照组相比,DMSO组的MAPK信号通路分子JNK、ERK1/2、p38以及p-JNK、p-ERK1/2、p-p38的蛋白表达无显著性差异。4)与DMSO组相比,Daph组的MAPK信号通路分子p-JNK（P＜0.01）、p-ERK1/2（P＜0.01）、p-p38（P＜0.05）的蛋白表达显著下降,而JNK、ERK1/2、p38的蛋白表达均无变化。5)与对照组相比,DMSO组的STAT3信号通路分子JAK2、STAT3、p-JAK2和p-STAT3的蛋白表达未见显著性差异。6)与DMSO组相比,Daph组的STAT3信号通路分子JAK2、STAT3的蛋白表达无变化但其磷酸化蛋白p-JAK2（P＜0.01）和p-STAT3（P＜0.01）的表达显著下降。7)与对照组相比,DMSO组的NF-κB信号通路分子NF-κB p105、NF-κB p65、IκB-α、以及p-NF-κB p105、p-NF-κB p65、p-IκB的蛋白表达无显著性差异。8)与DMSO组相比,Daph组的NF-κB信号通路分子NF-κB p105、NF-κB p65、IκB-α的表达未见差异但p-NF-κB p105（P＜0.01）、p-NF-κB p65（P＜0.01）、p-IκB（P＜0.01）的蛋白表达显著下降。9)CCK8检测结果表明:瑞香素浓度在20μg/mL范围以内对A549细胞的活力没有明显影响。10)CCK8检测增殖结果表明:与对照组相比,DMSO组在24h、48h、72h对A549细胞增殖的影响无显著性差异;与DMSO组相比,Daph组能够抑制A549细胞的增殖,但当作用为24h时对A549细胞增殖的影响无显著性差异。当作用48h（P＜0.05）和72h时（P＜0.01）对A549细胞的增殖具有显著差异。11)克隆形成实验结果显示:与对照组相比,DMSO组未抑制A549细胞的集落形成;与DMSO组相比,Daph组的克隆形成团数明显减少（P＜0.01）,且具有显著性差异。12)细胞迁移实验结果显示:与对照组相比,DMSO组在24h、48h和72h的划痕愈合率无显著性差异;与DMSO组相比,Daph组在24h（P＜0.05）、48h（P＜0.01）和72h（P＜0.01）的抑制划痕面积缩小,且具有显著性差异。13)Transwell侵袭实验结果显示:与对照组相比,DMSO组侵袭穿过基质胶的细胞数量无显著性差异;与DMSO组相比,Daph组侵袭穿过基质胶的细胞数量明显减少,且具有显著性差异（P＜0.01）,A549细胞的侵袭受到抑制。14)与DMSO组相比,Daph组和JNK抑制剂组均可显著降低p-JNK表达（P＜0.01）,JNK抑制剂+Daph组可显著降低p-JNK表达（P＜0.01）。15)与DMSO组相比,Daph组（P＜0.05）和JNK抑制剂组（P＜0.01）均可显著降低p-STAT3表达,JNK抑制剂+Daph组可显著降低p-STAT3表达（P＜0.01）。16)与DMSO组相比,Daph组和JNK抑制剂组均可显著降低p-NF-κB p105、p-NF-κB p65和p-IκB的表达（P＜0.05）,JNK抑制剂+Daph组可显著降低p-NF-κB p105、p-NF-κB p65和p-IκB的表达（P＜0.01）。结论:1)瑞香素可减少肺腺癌A549细胞中促炎因子IL-18的释放。2)瑞香素可以抑制肺腺癌A549细胞中MAPK信号通路的激活,主要通过JNK通路来抑制STAT3和NF-κB通路的激活。3)瑞香素可以抑制肺腺癌A549细胞的增殖、克隆形成、迁移和侵袭。