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背景及目的： 非酒精性脂肪肝疾病（Non-alcoholic Fatty Liver Disease, NAFLD）是一种常见的慢性肝脏疾病，影响着全球近四分之一的人群。并且常常与肥胖、II 型糖尿病、高脂血症、高血压等代谢疾病并存。NAFLD的发病机制复杂，对该疾病的深入研究有助于我们寻找预防和治疗 NAFLD 的新靶点。去乙酰化酶 SIRT6 在维持糖脂代谢稳态方面发挥着重要的作用，我们在SIRT6肝脏特异性敲除小鼠模型基础上探讨SIRT6对肝脏糖脂代谢的作用和机制。 方法： 1. 利用Cre-LoxP重组酶系统，将SIRT6-Flox小鼠与 Alb-Cre工具小鼠交配，获得SIRT6肝细胞特异性敲除（SIRT6-LKO）小鼠，用琼脂糖凝胶电泳、Western blot和免疫组织化学(immunohistochemistry，IHC)的方法对小鼠模型进行验证。 2. 利用链脲霉素（Streptozocin，STZ）腹腔注射和高脂饮食（High fat diet，HFD）结合的方法诱导小鼠脂肪肝模型，通过监测小鼠体重和血糖评价造模效果及肝脏SIRT6缺失对于小鼠体重和血糖的影响。 3.造模结束后，通过肝脏形态、肝脏/体重比、血清学分析、苏木素-伊红（Hematoxylin-Eosin, HE）染色、油红O染色和天狼星红染色、脂代谢关键酶的表达情况等指标评价SIRT6肝细胞特异敲除对于肝脏脂质代谢的影响。 4.利用SIRT6敲除和过表达人永生化肝细胞系（L02细胞系）探究SIRT6在脂代谢中的作用及机制。在油酸（oleic acid,OA）刺激后进行Bodipay脂滴染色，观察SIRT6对于脂质生成的影响。通过Western blot和qPCR验证SIRT6敲减对脂代谢相关分子C/EBPα的调控作用。 5.构建C/EBPα敲减和过表达L02细胞系，通过油红、尼罗红脂滴染色和Western blot的方法验证C/EBPα在肝细胞脂质代谢中的作用。 6. 利用染色质免疫共沉淀以及突变SIRT6去乙酰化功能位点的方法探究SIRT6调控C/EBPα的机制。 结果： 1. 成功构建SIRT6肝细胞特异性敲除（SIRT6-LKO）小鼠模型。 2. STZ-HFD条件下，SIRT6-LKO和WT小鼠的体重无明显差异，但SIRT6-LKO小鼠血糖明显高于WT小鼠； 3. STZ-HFD造模条件下，SIRT6-LKO小鼠的肝脏比同窝WT小鼠的肝脏体积更大，包膜更紧张，色泽更白，油腻感更强，部分肝脏表面有肝囊肿样变化。SIRT6-LKO小鼠肝脏/体重比明显高于野生对照组小鼠。HE染色和油红O染色结果提示SIRT6敲除小鼠的肝脏脂肪变明显重于野生对照组。天狼星红染色结果提示SIRT6敲除小鼠汇管区外的纤维胶原明显增多。血清学分析发现，在STZ-HFD条件下，SIRT6缺失加重小鼠肝功损伤，其甘油三酯，总胆固醇，谷丙转氨酶，谷草转氨酶，总胆红素都明显高于对照组。并且脂合成代谢酶乙酰辅酶 A 羧化酶（Acetyl-CoA carboxylase,ACC1）和脂肪合成酶（Fatty Acid Synthase ,FASN）表达增加，脂质分解酶肉毒碱棕榈酰转移酶（carnitine palmitoyl trans-ferase1a，Cpt1a）表达减少。 4. 在油酸刺激条件下，SIRT6 敲除后细胞脂质生成明显增加，提示人肝脏细胞中 SIRT6 的敲除能够促进脂质形成。我们还发现，SIRT6 敲除后脂代谢相关分子C/EBPα的表达明显下调，反之，SIRT6过表达后C/EBPα表达上调。 5. 成功构建了C/EBPα敲减和过表达L02细胞系，发现C/EBPα敲减后促进脂滴形成及脂合成代谢酶乙酰辅酶 A 羧化酶（Acetyl-CoA carboxylase,ACC1）和脂肪合成酶（Fatty Acid Synthase ,FASN）的表达 6. 通过染色质免疫共沉淀实验发现SIRT6能够结合在C/EBPα的启动子区域，突变SIRT6去乙酰化功能位点后直接影响C/EBPα的表达水平和SIRT6在其启动子 区域的结合能力。 结论： SIRT6在肝脏糖脂代谢中发挥保护性作用，在STZ-HFD诱导的小鼠脂肪肝模型中 SIRT6 的缺失可引起严重的高血糖和肝脂肪变。在人肝脏细胞系中，SIRT6 通过调控C/EBPα的表达影响肝细胞内脂质合成，这一发现为NAFLD的预防和治疗提供了新靶点。