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目的：经研究发现脂质代谢紊乱和炎症反应脂质浸润是冠心病重要的发病机制。由丹参和三七构成的丹七片作为临床治疗冠心病的常规用药,具有确切的抗炎和降脂的双重功效。但其内在药理机制尚未完全清楚。本研究基于心肌缺血动物模型,采用蛋白印迹技术(western blot, WB)以及实时荧光定量聚合酶链式反应技术(real-time Polymerase chain reaction, real-time PCR),通过分析丹七片对于冠心病大鼠心肌细胞中炎症信号通路相关因子、脂质代谢通路相关因子、磷脂酰肌醇3-激酶(phosphate idylinositol 3-kinase,PI3K)-蛋白激酶B(protein kinase B, AKT112)-细胞外信号调节激酶1/2(extracellular signal-regulated kinase 112, ERK112)信号通路蛋白的影响以及PPARs不同亚型与炎症以及脂质代谢紊乱的关系,以期揭示丹七片通过过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferator-activated receprors, PPARs)治疗冠心病的药理作用机制。方法：1选购120只SPF级雄性Sprague-Dawley (SD)大鼠,体重为220±10g,适应性饲养一周以后,随机分为假手术组和模型组,假手术组只穿线不结扎,模型组施行左冠状动脉结扎术。术后,将造模成功且符合筛查标准的大鼠列为研究对象,将冠心病心肌缺血大鼠随机分为模型组、阳性药组(阿司匹林组和卡托普利组)和丹七片组。术后第二天开始灌胃给药,持续给药28d。丹七片的给药剂量为1.5 g·kg-1大鼠体重,阳性药卡托普利的给药剂量为1.2mg·kg-1大鼠体重,阳性药阿司匹林的给药量为53.3mg·kg-1,药物均以水溶方式灌胃给药,灌胃体积为10mg·kg-1大鼠体重；假手术组和模型组动物给予同体积生理盐水。2采用心脏超声的方法,测试各组大鼠心脏的射血分数(ejectionfraction, EF)、短轴缩短率(fractional shortening, FS)、左室舒张末期内径(left ventricular end-diastolic diameter, LVEDd)以及左室收缩末期内径(left ventricular end-stolic diameter, LVEDs)的变化情况。取材之前,腹主动脉取血,采用血液生化检测血脂代谢水平。3采用WB法来检测炎症信号通路蛋白磷脂酶A2(phospholipase A2, PLA2)环氧化酶-2(cyclooxygenase2, COX2)、核转录因子-κB(nuclear factor-κB, NF-κB)、信号转导及转录活化因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)在各组中的含量变化。4采用实时荧光定量聚合酶链式反应技术(real-time PCR)的方法检测脂质代谢通路相关指标脂肪酸转位酶(fattty acid tranclocase, FAT/CD36)、载脂蛋白-CⅢ(apolipoproteinC-III, ApoC-III)和ATP-结合核蛋白1(ATP-binding cassette protein 1,ABCA1)的变化。采用WB方法测定脂质吸收-转运-修饰蛋白载脂蛋白A-Ⅰ(apolipoprotein A-Ⅰ, ApoA-Ⅰ)、脂肪酸结合蛋白(fatty acid-binding protein, FABP)、肉碱棕榈酰转移酶-1A(carnitine palmitoyl transferase 1A, CPT-1A)、3-羟-3-甲戊二酰辅酶A还原酶(3-hydroxy-3 methyl-glutaryl-CoA reductase, HMGCR)和细胞色素P450(cytochrome P450, CYP5450)等各相关指标的变化情况。5采用real-time PCR的方法检测PPARs不同亚型(PPARα和PPARβ/δ)含量的变化,采用WB方法测定PI3K-AKT1/2-ERK1/2信号通路蛋白、PPARs各亚型(PPARα和PPARγ)及其相关通路因子视黄醛类X受体A(retinoid X receptor A, RXRA)和过氧化物酶体增殖物活化受体协同刺激因子1-α(peroxisome proliferator-activated receptorco-stimulating factor 1-α, PGC-1α)的变化。结果：1心脏超声的结果显示,与假手术组相比,模型组大鼠的LVEDd上升了53.53%(P=0.000),LVEDs上升了156.73% (P=0.000),EF值下降了49.96% (P=0.000),FS值下降了58.29%(P=0.000),提示冠心病心肌缺血大鼠发生了心功能的改变。在给予丹七片干预治疗后,冠心病心肌缺血大鼠的LVEDd值下降了32.55% (P=0.194)EF值增加了43.00%(P=0.036)和FS值增加了54.06%(P=0.041),各项指标均有一定程度的改善,说明丹七片有抑制心肌肥厚和改善心功能的作用。2血液生化结果发现：与假手术组相比,模型组大鼠的血清总胆固醇(total cholesterol, TC)、甘油三酯(triglycerides,TG)、低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol, LDL-C)以及极低密度脂蛋白胆固醇(very low-density lipoprotein cholesterol, VLDL-C)分别上升了19.95%(P=0.299)、136.88% (P=0.004)、127.82%(P=0.031)以及140.00%(P=0.003),同时,高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein cholesterol, HDL-C)的含量下降了43.46%(P=0.011),提示冠心病心肌缺血大鼠发生了较严重脂质代谢紊乱现象。丹七片组大鼠TC的含量下降3.37%(P=0.881)、TG的含量下降了58.23%(P=0.005)、LDL-C的含量下降了52.09%(P=0.006)、VLDL-C的含量下降了75.00%(P=0.000),同时HDL-C的含量上升了62.50%(P=0.037),说明丹七片有抑制脂质代谢紊乱和改善脂质代谢状态的作用。3通过WB的方法测定炎症信号通路蛋白发现,与假手术组相比较,模型组大鼠的PLA2、COX2和STAT3分别上升了47.5%(P=0.002)、60.13%(P=0.022)和113.9%(P=0.000),模型组大鼠的炎症通路蛋白NF-κB上升了35.75%(P=0.0745)。丹七片干预治疗以后,炎症通路因子(PLA2、COX2、NF-κB)水平有所改善,并且具有统计学意义。丹七片组大鼠的PLA2和COX2分别下降了25.11%(P=0.012)和59.74%(P=0.001),丹七片组大鼠的炎症通路蛋白NF-κB下降了56.2%(P=0.000),但丹七片干预之后STAT3水平并未见改善,丹七片组大鼠的STAT3反而上升了49.6%。(P=0.001),说明丹七片的抗炎作用可能是通过NF-κB而非STAT3介导的PLA2-COX2信号转导通路来实现的,进而达到治疗冠心病的目的。阳性药主要对NF-κB的调节起了作用,具有统计学意义。4 real time-PCR方法测定脂质代谢通路相关指标(CD36、ApoC-Ⅲ、ABCA1)以及WB方法测定脂质吸收-转运-修饰蛋白(ApoA-Ⅰ、FABP、CPT-1A、HMGCR、P450)发现,在给予丹七片治疗后,冠心病心肌缺血大鼠的血脂水平得以缓解,脂质代谢紊乱情况也有所改善。与假手术组相比,模型组大鼠的脂质相关蛋白ApoA-Ⅰ、FABP和CPT-1A含量分别下降了12.63%(P=0.016)、10.00%(P=0.381)和28.44%(P=0.017),在给予丹七片治疗后,丹七片组大鼠的脂代谢相关因子ApoA-1、FABP和CPT-1A的含量分别上升了59.53%(P=0.000)、28.97%(P=0.03)和54.93%(P=0.001)。与假手术组相比,模型组大鼠的脂质修饰蛋白HMGCR和P450的含量上升了45.11%(P=0.045)和79.79%(P=0.000),在给予丹七片干预后,与模型组大鼠相比较,丹七片组大鼠HMGCR和P450的含量分别下降了73.25%(P=0.000)和48.86%(P=0.000)。丹七片对冠心病心肌缺血大鼠的脂代谢相关因子CD36、ApoC-Ⅲ和ABCA1虽然有改善作用,但是不具有统计学意义。5通过WB方法测定PPARs及其相关因子发现与假手术组相比,模型组大鼠的PPARα和PPARγ的含量分别下降了24.25%(P=0.312)和64.8%(P=0.001)。PPARs相关因子RXRA和PGC-1 α的含量分别下降了42.09(P=0.015)和61.75%(P=0.029)。在给予丹七片治疗后,丹七片组大鼠的PPARα和PPARγ的含量分别上升了141.31%(P=0.000)和352.54%(P=0.000),其相关因子RXRA和PGC-1 α的含量分别上升了123.71%(P=0.000)和103.41%(P=0.147)。通过real-time PCR方法测定PPARs不同亚型(PPARα和PPARβ/δ)的含量变化,发现PPARα和PPARβ/δ的含量分别上升了507.77%(P=0.032),这与WB的结果相一致。丹七片可以上调PPARs以及其相关因子的含量。6通过WB方法测定信号通路蛋白PI3K-AKT1/2-ERK1/2的含量变化发现,与假手术组相比,模型组大鼠PI3K、AKT1/2以及ERK1/2的含量分别下降了63.41%(P=0.015),60.23%(P=0.000)以及52.12%(P=0.002)。在给予丹七片干预治疗后,丹七片组大鼠PI3K、AKT1/2以及ERK1/2的含量分别上升了89.62%(P=0.184)、96.39%(P=0.000)以及138.67%(P=0.000)。提示冠心病心肌缺血后可以降低PI3K-AKT1/2-ERK1/2通路相关因子的含量。结论：冠心病心肌缺血大鼠发生了炎症反应以及脂质代谢紊乱的情况,模型组大鼠血液中TC、TG、LDL-C以及VLDL-C的含量升高而HDL-C的含量降低。在给予丹七片干预治疗之后,发现炎症反应情况以及脂质代谢紊乱的情况得以缓解。超声结果显示,丹七片可以改善冠心病心肌缺血大鼠的心脏功能。WB结果显示,丹七片可以潜在的调节PLA2-COX2通路,也可以通过抑制NF-κB发挥其抗炎作用,进而达到治疗冠心病的目的。丹七片改善脂质代谢紊乱是通过对脂质吸收-转运-修饰相关因子(CD36、ApoC-Ⅲ、ABCA1、ApoA-I、FABP、CPT-1A、MGCR、P450)的影响,达到调节脂质代谢紊乱情况的目的。进一步研究发现,丹七片对PPARs各亚型具有上调作用,进而上调PI3K-AKT1/2-ERK1/2通路蛋白的表达,进一步调节脂质代谢紊乱及炎症反应情况。本研究初步阐释了丹七片抗炎调节血脂的药理机制,为临床丹七片的精制和改良提供了实验依据。