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实验目的:研究高频及低频重复经颅磁刺激对戊四氮致痫大鼠的影响,观察磁刺激作用后大鼠癫痫发作的行为学变化并探讨其可能的机制。连续2周为SD大鼠腹腔注射戊四氮以诱发癫痫,每日在腹腔药物注射后之后分别采用低频(0.5Hz)、高频(10Hz)及假性重复经颅磁刺激对各组大鼠进行重复经颅磁刺激,观察戊四氮诱导及不同频率重复经颅磁刺激作用后癫痫发作情况,通过蛋白印迹、免疫荧光等方法对相关蛋白进行检测以探索其可能的机制。实验方法:将正常雄性SD大鼠随机分为四组,分别设立为为对照组(Control)、假性磁刺激组(Kindled)、低频重复经颅磁刺激组(Kr LFS)及高频重复经颅磁刺激组(Kr HFS)。其中Kindled组、Kr LFS组及Kr HFS三组以40mg/kg的剂量给予腹腔注射戊四氮,注射后密切观察并记录大鼠有无癫痫发作及癫痫发作情况,观察时间为1小时。经过6小时恢复期后Kr LFS、Kr HFS组分别予以低频(0.5Hz)及高频(10Hz)经颅磁刺激;假刺激组腹腔注射戊四氮后给以只有相应声音而无磁场作用的刺激,连续2周。各组刺激总数均为1500脉冲。对照组则在相应的时间予以腹腔注射生理盐水。仪器采用英国Magstim Rapid2型号磁刺激仪,“8”字形线圈,刺激强度设置为为110%MT,每300个脉冲刺激之间间隔2min。每日腹腔注射戊四氮对大鼠行为学改变进行仔细观察,尤其是癫痫发作等级,发作潜伏期等进行详细记录。末次注射后进行详细的行为学观察记录,之后将各组大鼠处死后断头取脑,采用蛋白印记,实时荧光定量PCR及免疫组化、TUNEL检测等技术对大鼠海马组织相关蛋白进行检测,以期从行为学和分子生物学角度探讨重复经颅磁刺激对大鼠癫痫模型的的影响,对其潜在机制的进行研究。实验结果:1.腹腔注射戊四氮后给予低频重复经颅磁刺激刺激使大鼠致痫时间及发作潜伏期较假刺激明显延长(P<0.05),高频磁刺激作用组则较对照组明显缩短(P<0.05)。2.低频磁刺激作用后大鼠海马组织内GABAAR及GAD65表达水平较假刺激相比明显提高(P<0.05);高频磁刺激作用后与假刺激作用组相比GABAAR表达无明显差异(P>0.05)但GAD65的表达在高频磁刺激组中较假刺激组相比明显降低(P<0.05);NMDAR2A的表达水平在磁刺激组与假刺激组之间无明显差异(P>0.05)。3.免疫组化结果提示癫痫发作(Kindled组)大鼠海马神经元数量与对照组相比显著下降(P<0.05),致痫大鼠的低频磁刺激使神经元数量的减少低于假刺激大鼠(P<0.05)。Caspase-3及TUNEL检测结果提示低频磁刺激对癫痫发作后海马神经元的凋亡较假刺激相比具有抑制作用(P<0.05),GFAP在低频磁刺激组的表达下降提示重复经颅磁刺激可能抑制了致痫大鼠的星形胶质细胞增殖活化。结论:戊四氮诱导SD大鼠癫痫发作后,低频重复经颅磁刺激抑制了癫痫的发作,高频重复经颅磁刺激可对戊四氮点燃的癫痫发作起到易化作用。而此种作用可能通过对中枢神经系统兴奋性及抑制性神经传导通路中的某些受体、酶类如NMDAR2a、GAD65、GABAAR等的表达进行调控,它们的表达水平也受到经颅磁刺激的影响,低频重复经颅磁刺激对海马区神经元的凋亡及星形胶质细胞增殖活化起到一定的抑制作用。