1991年,Van der Bruggen等用基因克隆技术首次发现恶性黑色素瘤细胞表达一种MAGE-1基因(melanoma antigen-1),其编码抗原在黑色素瘤及其他多种肿瘤中均有不同程度表达,正常组织除睾丸和胎盘外均不表达。进一步研究表明,MAGE基因是一个大家族,定位于X染色体,有一个开放阅读框,编码蛋白质C末端含有约200个氨基酸残基的同源序列。其中MAGE-A1基因全长4.5kb,由3个外显子组成,与MAGE家族的多数成员一样,氨基酸编码序列全部位于第3外显子。由于该基因只表达于恶性肿瘤及免疫隔离部位,目前多数研究集中于其所编码蛋白在肿瘤免疫治疗方面的应用。有关MAGE-A1基因在肿瘤发生、发展中的作用及对细胞生长的影响报道较少。本文观察了NIH3T3细胞转染MAGE-A1基因后,其细胞周期、细胞凋亡及细胞移动力的变化,以探讨MAGE-A1基因对NIH3T3细胞生物学特性的影响。 研究方法 1.人肝癌细胞系BEL7402总RNA的提取和MAGE-A1基因的扩增。采用Trizol一步法抽提总RNA,RT-PCR扩增MAGE-A1基因片段。 2.真核表达载体pEGFP-C3-A1和pcDNA3.1-A1质粒的构建 用限制性核酸内切酶EcoR Ⅰ及Hind Ⅲ分别消化pEGFP-C3、pcDNA3.1和MAGE-A1基因片段,回收相应的核酸片段,经T4DNA连接酶连接,构建重组真核表达载体pEGFP-C3-A1和pcDNA3.1-A1。