昆虫病原线虫共生菌中plu4436基因的克隆与表达

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昆虫病原线虫(entomopathogenicnematodes,EN)现已成为一类新型生物杀虫剂,已商品化并成功用于防治多种害虫。昆虫病原线虫共生菌在EN对害虫的致病力中起关键性作用。共生菌分泌的杀虫毒素具有高效、杀虫谱广的优点,已受到广泛关注。对这类杀虫毒素进行深入研究,可将其基因转入植物,或者构建高效表达系统生产杀虫毒素直接用于害虫防治,有助于延缓害虫对转Bt基因抗虫作物的抗性压力,扩大转基因抗虫作物的抗虫谱。 本研究用PCR方法从昆虫病原线虫共生菌株中扩增到了plu4436基因。将其连接到pQE30载体上,并在大肠杆菌中进行诱导表达,得到了Plu4436蛋白。利用Ni-NTAagarose对该蛋白进行纯化,用Ph4436蛋白对四种鳞翅目昆虫棉铃虫、斜纹夜蛾、甜菜夜蛾以及粉纹夜蛾的初孵幼虫进行了口服毒力测定,发现Plu4436蛋白对以上四种试虫均没有毒性。这一结果说明Plu4436蛋白单独表达可能没有杀虫活性,需要和其他蛋白联合作用才具有杀虫功效。
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