香蕉枯萎病区土壤微生物多样性分析及拮抗放线菌的分离与鉴定

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香蕉枯萎病是由尖孢镰刀菌古巴专化型(Fusarium oxysporum f. sp. cubense)引起的病害,是世界香蕉产区的分布最广的毁灭性病害之一。生物防治因其高效性、安全性等特点,是日前研究防治香蕉枯萎病的重要方法之一。土壤微生物在土壤有机质分解、土壤环境修复方而具有重要作用,其多样性也在一定程度上反映了土壤环境的质量;植物土传病害与土壤微生物群落之间有若密切的关系。因此,研究香蕉枯萎病区土壤微生物多样性以及利用安全高效的生防菌防治香蕉枯萎病具有重要的现实意义。本研究采集海南省临高县南宝、美台与皇桐三地的枯萎病发病蕉园植株根际土壤与健康蕉园土壤样品,采用常规方法测定土壤理化性质,以T-RFLP技术研究不同地区发病与健康土壤微生物的多样性,分析土壤微生物群落结构及其多样性、土壤理化性质与枯萎病是否发病之间的关系,并对土壤中主要微生物进行定性分析;此外,采用稀释涂布平板法、平板对峙培养法分离、筛选对香蕉枯萎病菌4号小种有秸抗活性的放线菌,通过平板生长抑制法、抑制孢子萌发法及抑制菌丝生长法研究秸抗放线菌的多抗活性(香蕉枯萎病菌1号与4号小种、香蕉长形斑病菌、香蕉炭疽病菌、荔枝炭疽病菌、芒果炭疽病菌和芒果链格孢霉长形斑病菌),并对菌株进行形态学及培养特征、生理生化特征与16S rDNA序列的分子生物学鉴定。主要结论如下:(1)发病蕉园的植株根际土壤的pH、含水量、有机质、全N、速效P、有效N、速效K等指标大多低于健康蕉园,其中,发病与健康蕉园土壤pH、速效P的差异达显著水平。(2)发病蕉园的植株根际土壤具有比健康蕉园更为丰富的微生物多样性,主要优势菌经定性分析为Cytophaga sp.、Bacillus subtilis、Staphylococcus arlettae str.与Eubacterium ruminantium str.;健康蕉园土壤优势菌为Bacillus subtilis str.、Bradyrhizobium sp.、Rhodopseudomonas palustris str.、Staphylococcus arlettae str.与Eubacterium ruminantium str.。(3)基于T-RFLP的香浓指数、均匀度指数受pH、含水量、有机质、全N、速效P、有效N、速效K等土壤环境影响较小,辛普森指数与土壤因呈现一定的相关性,同时土壤因子对土壤中多数微生物的数量与分布也具有一定程度的影响。(4)分离、筛选到一株秸抗放线菌A2-g十-41,根据形态、生理生化特征和16S rDNA序列分析结果,该菌株被鉴定为壮观链霉菌Streptomyces spectabilis。(5)A2-g+-41对香蕉枯萎病菌1号小种、4号小种与香蕉炭疽病菌等7种植物病原真菌均有抑制作用:在平板上的抑菌带宽度达到11.00-14.93mm,对菌丝生长的抑制率达到23.89-74.89%,对病原真菌分生孢子萌发的抑制作用随着稀释倍数的增加而呈下降趋势,发酵原液的抑制率最高,达到83.12-93.96%,为真菌性植物病害的生物防治提供新的微生物资源。
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