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目的：MicroRNA(miRNA)是真核生物中一类长度约为22-28个核苷酸的小分子非编码RNA,参与生物体生长调控,其异常表达可能导致肿瘤发生,影响其发展和预后。研究发现miRNA-34b/c和miRNA-124a在许多器官广泛表达,但在许多肿瘤组织中呈低表达状态,如在胃癌组织中miRNA-34b/c和miRNA-124a的表达低于正常胃粘膜。DNA启动子区甲基化水平影响基因表达,miRNAs基因启动子区高甲基化可导致miRNA表达减低。本研究通过检测胃癌组织中miRNA-34b/c和miRNA-124a基因启动子区的甲基化水平,来探讨DNA基因甲基化对miRNA表达的影响。细胞周期蛋白依赖性激酶6(CDK6)与胃癌的发生高度相关,研究发现,它是miRNA-34b/c和miRNA-124a的靶蛋白。本研究同时检测CDK6在胃癌组织中的表达,来探讨miRNA基因甲基化与CDK6表达的相关性,以揭示胃癌发病机理并寻找可用于胃癌早期诊断、治疗及判断预后的分子标志物。材料和方法：180例新鲜内镜活检标本其中,胃癌组40例,男22例,女18例,平均年龄57岁。胃癌组依组织学类型不同分为腺癌组、印戒细胞癌组和未分化癌组,依分化程度不同分为高分化组、中分化组和低分化组；依淋巴转移分为有淋巴转移组和无淋巴转移组；依临床TNM分期不同分为Ⅰ+Ⅱ期组和Ⅲ+Ⅳ期组。正常(正常或浅表性胃炎)对照组40例,男21例,女19例,平均年龄50岁。2提取DNA,应用甲基化特异性PCR (MSP)方法检测组织中miRNA-34b/c和miNA-124a基因启动子区甲基化。3免疫组化SP法检测组织中CDK6的表达。结果：1两种niRNA基因启动子区高甲基化阳性率miRNA-34mib/c和miRNA-124a基因启动子区高甲基化阳性率在胃癌组织及正常粘膜中比较,差异有均统计学意义(P<0.05)。2 miRNAs基因启动子区高甲基化阳性率与临床病理特征的关系miRNA-124a基因启动子区高甲基化阳性率在不同分化程度组间比较,差异有统计学意义(P<0.05),高分化组明显低于低分化组(P<0.05),而高分化组与中分化组、中分化组与低分化组之间比较,差异均无统计学意义(P>0.05)；miRNA-34b/c启动子区高甲基化阳性率在有淋巴结转移和无淋巴结转移组比较,差异有统计学意义(P<0.05)；与患者性别、年龄、组织学类型及临床分期等的差异均无统计学意义(P>0.05)。3联合检测结果Ⅰ+Ⅱ期和Ⅲ+Ⅳ期两组启动子区高甲基化联合检测概率分布相比,差异有统计学意义(P<0.05)。不同年龄、性别、组织类型、分化程度及淋巴转移组启动子区高甲基化联合检测概率分布相比,差异均无统计学意义(P>0.05)。4 CDK6表达胃癌组织和正常对照组CDK6表达阳性率相比,差异有统计学意义(P<0.05)；两组CDK6表达强度相比,差异有统计学意义(P<0.05)。5两种miRNA基因启动子区甲基化水平及联合检测结果与CDK6表达强度的相关性胃癌组织中miRNA-34b/c和niRNA-124a基因启动子区甲基化水平与CDK6表达强度均成正性相关关系(r=0.252、0.300,P<0.05)。两种基因启动子区高甲基化联合检测结果与CDK6表达强度之间存在正性相关关系(r=0.658,P<0.05)。结论：1胃癌组织存在miRNA-34b/c和miRNA-124a基因启动子区高甲基化。2 miRNA-34b/c基因启动子高甲基化与肿瘤淋巴结转移有关,miRNA-124a基因启动子区高甲基化与组织分化程度有关。3两种基因启动子区高甲基化联合检测概率分布与肿瘤临床分期有关,提示胃癌的发生发展受到多种miRNAs基因甲基化的调控,通过检测miRNAs基因启动子区甲基化水平有助于胃癌的诊断,判断分期和预后,并为寻找新的肿瘤治疗方法提供可能。4两种基因启动子区高甲基化水平及联合检测结果与CDK6表达强度均呈正相关,提示两种基因甲基化对CDK6蛋白的影响,提示miRNA在胃癌发生中的重要作用,miRNAs和CDK6联合检测可能做为一种诊断胃癌、观测疗效判断预后的重要检查方法。