论文部分内容阅读
【目的】研究镉对孕激素合成过程中类固醇激素合成急性调节蛋白(StAR)、细胞色素P450胆固醇侧链裂解酶(P450scc)基因表达变化及其与环磷腺苷(cAMP)含量改变的关系,为研究镉对孕激素合成影响的分子机制,进而为探讨镉的生殖内分泌干扰作用及其机制研究提供科学依据。【方法】1.未成年Wistar大鼠皮下注射孕马血清促性腺激(PMSG) 100IU,48小时后,取出卵巢颗粒细胞体外培养,备用。取备用细胞随机分成四组,染镉剂量分别为0、10、20、40μM,孵化30分钟后,用放射免疫方法测孕酮、cAMP(环磷腺苷)含量;用RT-PCR方法测P450scc、StAR蛋白mRNA表达水平。2.再取备用颗粒细胞随机分为三组,分别为空白对照组、40μM CdCl2、1mM 8-Br-cAMP(cAMP类似物)+40μM CdCl2,培养2小时后,测孕酮含量及P450scc、StAR蛋白mRNA表达水平。3. 48只成年雌性Wistar大鼠按体重随机分为4组,每组12只,在大鼠进入动情间期时,皮下注射镉,浓度分别为2.5,5,7.5mg/kg,并设一个生理盐水对照组。染镉24小时后,测量血清孕酮水平,卵巢颗粒细胞数量,取卵巢颗粒细胞培养(方法同上),测孕酮含量以及StARmRNA、P450sccmRNA的表达水平。【结果】体外颗粒细胞染镉实验结果:1.不同剂量染镉组卵巢颗粒细胞孵育液中孕酮含量明显下降,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01),且不同剂量组之间差异有统计学意义(P<0.01)。2.不同染镉剂量组cAMP含量表现为:随着染镉剂量的增加,cAMP含量逐渐减少,并且高剂量组(40μM)和中剂量组(20μM)cAMP含量与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01)。3.颗粒细胞染镉(40μM CdCl2)后,孕酮含量减少,差异有统计学意义(P<0.01),与空白对照组比较降低了25%。加入1 mM 8- Br -cAMP共同培养后,孕酮含量明显增加,与单纯染镉组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。而与对照组相比,逆转了40μMCdCl2所导致的孕酮含量的降低,且比对照组明显增加(P<0.01)。4.颗粒细胞染镉后,StARmRNA表达强度明显下降,且各组间差异有统计学意义(P<0.01);P450scc mRNA的表达强度各组间差异有统计学意义(P<0.01),各剂量组的表达强度均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。5.在染镉时,加入1mM 8-Br-cAMP后,与单纯染镉组(40μM)相比,StARmRNA表达强度增高,且差异有统计学意义(P<0.05);与对照组相比,低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01);40μM组P450sccmRNA表达强度低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01),比对照组降低30%;加入1mM 8-Br-cAMP后,P450scc mRNA表达强度增加,表现为加入8-Br-cAMP组的表达强度高于40μM单纯染镉组,低于对照组,但差异无统计学意义。动物体内染镉实验结果:1.各染镉组大鼠血清孕酮水平明显下降,与对照组相比差异有统计学(P<0.01)。2.高剂量组(7.5mg/kg)卵巢颗粒细胞孕酮含量与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01);并且高剂量组与中级量组、低剂量组比较差异有统计学意义。3.卵巢颗粒细胞数量呈下降趋势,且高剂量组与对照组比较差别有统计学意义(P<0.05)。4.各组间颗粒细胞中StARmRNA表达强度有显著差异(P<0.01);高剂量组和中剂量组的表达强度均低于对照组,差异有统计学意义。各组间P450scc mRNA的表达有显著差异(P<0.01);高剂量组、中剂量组与对照组差异有统计学意义(P<0.01)。【结论】1.镉具有明显的生殖内分泌干扰作用,表现为:体内外染镉大鼠卵巢颗粒细胞数量减少、颗粒细胞孕激素水平和血清孕激素水平均下降,提示孕激素合成功能障碍。2.镉可通过直接和(或)间接途径影响孕激素合成过程中StAR蛋白和P450scc的表达进而干扰孕激素的合成。这可能是镉的生殖内分泌干扰作用的重要机制之一。3.镉可影响细胞内cAMP的含量,从而降低cAMP所介导的StAR蛋白和P450scc的表达。这可能是镉影响StAR蛋白和P450scc基因表达的机制之一。4.在本实验条件下,机体内下丘脑-垂体-卵巢轴的内分泌调节作用对镉所致孕激素合成障碍的影响并不明显或镉可能不通过下丘脑-垂体-卵巢轴的内分泌调节的调控而直接作用于孕酮的合成过程。