不同种群罗氏沼虾遗传多样性的研究

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采用RAPD技术,对省级斗门罗氏沼虾良种场提供的四个种群的罗氏沼虾:广东本地人工多代繁殖种群(G)、自江苏吴江引进的种群(J)、自上海水产研究所引进的种群(S)以及自越南引进的野生种群(Y)的遗传多样性进行了研究。各种群罗氏沼虾个体基因组DNA的提取和纯化:采用SDS-蛋白酶K法进行提取,利用酚-氯仿-异戊醇进行纯化。对所得到的DNA进行检测,20℃保存。利用OPM组和OPB组随机引物对所提取的罗氏沼虾各种群的混合DNA和个体DNA进行扩增筛选,最后得到13个可用于正式扩增的引物。用下列反应条件:反应体系总体积为25μl,其中含10×buffer2.5μl(含2.0mmol/L镁离子浓度),200μmol/LdNTP(脱氧核苷三磷酸),1.5个单位Taq酶和20ng左右模板DNA。用下列PCR反应程序:反应过程包括47个循环:94℃变性40s,36℃退火50s,72℃延伸90s。首次循环前于94℃预变性5min,最后一个循环后于72℃延伸5min。
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