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第一部分人胰腺癌细胞survivin分子靶向诊断的实验研究
目的:采用荧光和分子信标探针技术(Molucular Beacon Probe)体外检测人胰腺癌细胞的survivin蛋白和mRNA表达以及survivin蛋白表达部位,为研究应用survivin靶向体内分子影像诊断提供实验依据。
材料和方法:采用Alexa Fluor488(绿色荧光)标记的抗人survivin单克隆抗体及兔lgG抗体分别检测经红色荧光标记的人胰腺癌细胞系BxPC-3,MiaPaca-2,XPA-1和R90等四株细胞系的活细胞以及细胞膜通透细胞survivin蛋白表达;采用红色荧光的survivin分子信标探针(Molucular Beacon Probesurvivin)检测绿色荧光标记的BxPC-3、XPA-1和正常腹腔单核巨噬细胞的survivin mRNA表达。
结果:在使用Alexa Fluor488(绿色荧光)标记的抗人survivin荧光单克隆抗体及兔lgG抗体检测的四株细胞系的活细胞的细胞膜、细胞浆及细胞核均未检测到绿色荧光,仅有抗人survivin荧光单克隆抗体检测的细胞通透处理的BxPC-3、XPA-1细胞核中检测到明显的绿色荧光。采用survivin分子信标探针检测的绿色荧光标记的BxPC-3、XPA-1细胞内检测到明显红色荧光,而正常腹腔单核巨噬细胞仅检测到极少量的红色荧光。
结论:survivin蛋白不在BxPC-3,MiaPaca-2,XPA-1和R90细胞膜上表达,仅在BxPC-3,XPA-1细胞核表达,BxPC-3,XPA-1 survivin mRNA高表达,正常腹腔单核巨噬细胞中极低水平的survivin mRNA表达。
第二部分胰腺癌荧光裸鼠模型的建立及其生物特性研究
目的:建立稳定、高表达绿色荧光蛋白(GFP)标记的胰腺癌裸鼠原位及皮下移植瘤模型,并对其生物学特性进行比较研究。
材料和方法:将绿色荧光蛋白标记的人胰腺癌细胞株BXPC-3-GFP接种于裸鼠皮下,建立人胰腺癌裸鼠皮下移植瘤模型,采用显微外科手术的方法原位及皮下移植裸鼠皮下绿色荧光肿瘤组织碎块,应用动物活体荧光影像系统定期观察人胰腺癌裸鼠原位及皮下移植瘤模型裸鼠,获得成瘤率、肿瘤体积、裸鼠体重、转移率、肿瘤的重量及血管密度等实验数据,并进行统计学分析。
结果:两组移植瘤模型的体内成瘤率均为100%,6只原位移植瘤模型裸鼠肿瘤有3只发生远处转移,6只皮下移植瘤模型裸鼠肿瘤无1例出现转移,两组模型的肿瘤转移差异不具有统计学意义(P>0.05),肿瘤重量及肿瘤血管密度均有显著差异(P<0.05),两组裸鼠体重在55d时有显著差异(P<0.05),两组裸鼠肿瘤体积在接种后20d、27d、30d及55d有显著差异(P<0.05)。
结论:绿色荧光蛋白标记的胰腺癌裸鼠原位移植瘤模型明显优于皮下移植瘤模型,较好的模拟了人胰腺癌自然生长和局部浸润及远处转移过程,是人胰腺癌体内研究理想的动物模型。