猪繁殖与呼吸综合征病毒GP3蛋白单克隆抗体制备与抗原表位鉴定

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猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)属于套式病毒目(Nidovirales)、动脉炎病毒科(Arteriviridae)、动脉炎病毒属(Arterivirus),主要的临床表现为发烧,早产,流产,死胎,木乃伊胎等猪群的繁殖障碍和呼吸道症状。GP3蛋白是病毒粒子囊膜的组成部分,是该病毒的次要结构蛋白之一,是由ORF3基因编码的糖基化糖蛋白,少量存在病毒粒子中,GP3能够诱导机体产生中和抗体,而且在细胞受体识别病毒粒子以及在病毒变异等方面具有重要意义。噬菌体展示技术研究抗原表位不仅可以证明抗原分子的具体结构与功能,还可以揭示抗原抗体的反应机制,并可广泛的用于研发多种多肽疫苗和新型药物。因此,本实验以PRRSV-HH08株为研究对象,制备了GP3蛋白单克隆抗体并对其抗原表位,进行了初步的研究。本实验以原核表达的PRRSV-GP3蛋白为免疫源免疫小鼠,通过常规方法进行细胞融合,3轮亚克隆后,成功筛选出1株抗PRRSV GP3蛋白的单克隆抗体,经亚类鉴定为IgG2a型,该株抗体的稳定性与特异性较好,不仅能够与重组GP3蛋白反应,而且能够与PRRSV有良好的反应性。应用噬菌体随机肽库对制备成功的这株1F7单抗进行4轮生物淘选,得到10株阳性噬菌体,测序后结果为:7个噬菌体序列一致为ATPLSSTTWLWR,这与PRRSV HH08株GP3氨基酸序列64-70位氨基酸有一定的相似度。噬菌体竞争抑制试验与ELISA方法证实筛选出的噬菌体多肽的空间构象和天然抗原表位相似,可以用于检测PRRSV及相关表位疫苗的研究,这对于PRRSV病毒的临床诊断奠定了一定的理论基础。
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