弧菌病在全球范围内暴发性流行,给水产养殖业带来巨大的经济损失,而且严重威胁人类健康。鉴于化学药物防治存在诸多弊端,采用疫苗免疫防治成为目前控制弧菌病的重要途径。弧菌的外膜蛋白(Outerme mbrane protein,OMP)是重要的疫苗候选蛋白的来源,筛选具有免疫原性的弧菌外膜蛋白,开发弧菌多价疫苗,对弧菌病的防治具有重大意义,但现行的病原菌外膜蛋白抗原主要筛选方法中,反向疫苗学工作量太大,而传统的免疫蛋白组学也要采用繁杂的二维电泳。　　为了更简单、快捷地筛选鉴定弧菌外膜蛋白抗原,本研究以两种常见病原弧菌副溶血弧菌和拟态弧菌为模型,建立了一种基于免疫沉淀的弧菌外膜蛋白抗原筛选新方法。首先,制备弧菌全菌抗血清,能与弧菌全菌发生特异性免疫反应。然后,全菌细胞与抗血清孵育,离心洗去未结合的血清成份,裂解细胞,沉淀免疫复合物。最后,采用一维电泳分离沉淀出的外膜蛋白抗原,并进行质谱分析鉴定。两个模型成功筛选到了8个外膜蛋白抗原,其中OmpU、OmpA和LamB已经被证实具有免疫原性,初步说明新方法的可行性。　　为了客观地评价新方法,进一步以两种常见病原弧菌弧菌副溶血弧菌和拟态弧菌为模型,采用传统的免疫蛋白组学方法作为对照。通过一维电泳的方法分离的外膜蛋白14个免疫印记显色的蛋白条带中13个蛋白条带含两种或两种以上蛋白;在拟态弧菌模型中,印记膜上的免疫显色条带无法在电泳凝胶中相同的位置上找到。这说明在传统免疫蛋白组学中,外膜蛋白分离不彻底会影响免疫检测结果,无法判断免疫显色条带中,哪个蛋白参与了免疫反应。另外一些低拷贝而免疫原性强的蛋白通过传统的免疫蛋白组学无法筛选出来,而新方法中就克服了以上问题,说明了新方法的优越性。　　最后,通过对只在新方法筛选到的外膜蛋白抗原副溶血弧菌的OmpU和BtuB蛋白以及传统免疫蛋白组学也可能筛选到的外膜蛋白抗原副溶血弧菌的OmpC进行重组表达纯化和免疫学性质分析。结果表明,三种外膜蛋白都具有免疫原性,其中OmpC在溶藻弧菌、拟态弧菌、霍乱弧菌、河弧菌和弗尼斯弧菌之间更是具有交叉免疫原性,说明了新方法的可靠性和实用性。　　综上所述,一种基于免疫沉淀的弧菌外膜蛋白抗原筛选新方法被初步建立,其相对于传统的免疫蛋白组学具有明显的优势。新方法可能也适用于革兰氏阳性菌和真菌表面蛋白抗原的筛选。