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卵巢癌(Ovarian Cancer,OVCA)的发病率在女性肿瘤中仅占2.5%,然而其在女性恶性肿瘤中死亡率却是最高的。卵巢癌的主要疗法包括:手术、联合化疗、靶向治疗、激素治疗等。尽管现有的治疗方式在持续改善,对原发性卵巢癌病变的综合治疗有了显著的进步,但目前尚无有效方法抑制卵巢癌的转移。因此,深入探索并明确卵巢癌侵袭和转移的详细分子机制对于其治疗是十分必要的。DAAM1(Dishevelled associated activator of morphogenesis-1)是一种肌动蛋白相关调节因子,是Wnt5a和Ⅳ型胶原蛋白诱导的信号转导分子,通过非经典Wnt或细胞外基质信号通路参与调节细胞极化、增殖和运动等生理过程。DAAM1对肌动蛋白依赖性细胞活动至关重要,在脊椎动物原肠胚形成、丝状伪足的形成、中心体重新定位等方面起着关键调节作用。在肿瘤的侵袭转移方面,DAAM1通过激活小G蛋白RhoA来促进肿瘤细胞的侵袭迁移。miRNA可导致mRNA的降解或抑制蛋白质的翻译。然而,目前在卵巢癌细胞中miRNA调控DAAM1表达的分子机制尚无探究。已有研究发现,miR-208a被认为是心肌梗死的标志物,也参与了多种肿瘤的发生发展过程。预测分析结果显示,DAAM1是miR-208a-5p的靶基因之一。尽管如此,miR-208a-5p是否通过DAAM1/RhoA参与卵巢癌细胞的侵袭迁移还有待证实。研究目的:本实验主要阐述在卵巢癌细胞中DAAM1通过激活RhoA调节微丝的形成,进而改变其侵袭与迁移能力;探究miR-208a-5p是否通过直接靶向DAAM1影响卵巢癌细胞的侵袭和迁移。本文揭示miR-208a-5p/DAAM1/RhoA轴在卵巢癌细胞侵袭和迁移中的作用,为卵巢癌的早期检测及治疗提供了可能的新靶点。实验方法:收集卵巢癌患者癌组织并进行病理鉴定后,通过实时定量PCR检测miR-208a-5p与DAAM1在卵巢癌组织标本中的表达。通过荧光素酶报告基因实验探究miR-208a-5p是否直接靶向DAAM1。通过划痕实验和侵袭实验研究miR-208a-5p/DAAM1/RhoA轴对卵巢癌细胞侵袭和迁移的影响。通过免疫印迹实验对DAAM1/RhoA信号通路相关蛋白的表达进行检测。最后用激光共聚焦荧光显微镜观测卵巢癌细胞微丝的变化情况。实验结果:临床标本检测的结果显示,DAAM1的高低表达与卵巢癌的远端转移有统计学联系,miR-208a-5p的表达量与远端转移和Ki67高低表达有统计学联系,暗示miR-208a-5p可能对卵巢癌具有抑制转移的作用。miR-208a-5p/DAAM1过表达或敲降实验表明,DAAM1对卵巢癌细胞侵袭和迁移具有重要的调节作用。荧光素酶报告基因实验结果显示,miR-208a-5p可直接负向调控DAAM1mRNA及蛋白的表达水平。过表达miR-208a-5p阻止了OVCAR-3卵巢癌细胞的侵袭和迁移,而DAAM1的过表达可以挽救由miR-208a-5p过表达引起的侵袭和迁移能力的下降。免疫印迹实验和激光共聚焦荧光显微镜观测发现,miR-208a-5p抑制DAAM1介导的RhoA激活和卵巢癌细胞中应力纤维的形成。结论:DAAM1对卵巢癌侵袭和迁移有显著的调控作用。miR-208a-5p可直接靶向DAAM1基因,通过阻断DAAM1/RhoA信号通路抑制卵巢癌的侵袭和转移。我们的研究提示,miR-208a-5p/DAAM1轴可作为抑制卵巢癌转移的新型临床靶点。