目前辽宁省水产品经济发展稳定,经济效益稳步增长。2016年,辽宁省水产养殖面积为115.4万公顷,产量高达404万吨,产值实现582亿元,成为辽宁省养殖业中重要产业之一。但细菌性疾病的爆发,造成了我省鱼类养殖业巨大的经济损失。病原微生物是引起细菌性疾病主要因素。然而多年来,辽宁省鱼类致病微生物种类不明确,相关检测技术检测周期长且准确率低,影响鱼类疾病的及时诊断与治疗,阻碍了我省鱼类养殖业经济的健康发展。为了解决以上问题,本研究对辽宁省鱼类养殖区域分布进行系统性调研,并且调查与分离鉴定了养殖鱼类的病原微生物,随后建立了四种常见弧菌属病原微生物的快速检测方法。首先,本研究对辽宁省31个鱼类养殖地点进行样本采集,样本以患有细菌性烂鳃病、细菌性肠炎、体表溃烂症和突眼病的鱼类为主。通过传统分离纯化与16S rRNA鉴定等方法,分离出71种优势菌株,其中弧菌属(Vibrio)病原微生物14种,气单胞菌属(Aeromonas)病原微生物9种。同时本研究着重调查了辽宁鱼类养殖业中常见的大菱鲆突眼病的细菌种群组成情况,对正常大菱鲆(Y.0)、轻度病症(Y.1)和重度病症(Y.2)的大菱鲆的细菌多样性分析显示,气单胞菌属,阪崎肠杆菌属(Cronobacter),沙雷氏菌属(Serratia),耶尔森氏菌属(Yersinia)为主要细菌属群。与正常大菱鲆对照相比,轻度病症和重度病症的大菱鲆气单胞菌属丰度明显上升,阪崎肠杆菌属、沙雷氏菌属、耶尔森氏菌属丰度下降,表明气单胞菌属是大菱鲆突眼病潜在致病微生物。以上结果表明,气单胞菌属和弧菌属为辽宁省水产品主要病原微生物。随后,本研究对大菱鲆健康幼鱼进行人工感染实验,注射溶藻弧菌的大菱鲆幼鱼表现出鱼鳃颜色变黑、糜烂,肠壁发炎充血,排泄物变白等症状,证明溶藻弧菌是引起大菱鲆细菌性肠炎主要病原菌之一。最后,由于弧菌属病原微生物对鱼类养殖业有着重要危害,同时缺乏高灵敏度的快速检测方法,本研究对副溶血弧菌(Vibrio parahemolyticus)、创伤弧菌(Vibrio vulnificus)、溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)和麦氏弧菌(Vibriometschnikovii)四种弧菌属主要病原微生物的toxR、recA、recB、pyrH、topA和rpo D特异性基因建立PCR快速检测方法。本研究从33对引物中优选出10对进行后续PCR实验,结果显示,副溶血弧菌引物pyrH-Vp和recB-Vp,创伤弧菌引物recA-Vv、rpo D-Vv、topA-Vv和toxR-Vv,溶藻弧菌引物toxR-Va-1、toxR-Va-2和topA-Va,及麦氏弧菌引物recA-Vm均表现出高特异性和高灵敏性,模拟检测实验表明以上10对引物均可快速检出目的病原菌。本研究不仅为鱼类养殖过程中四种弧菌属病原微生物的检测提供了理论依据和方法体系,同时为辽宁省乃至我国水产品养殖产业的健康发展奠定了基础。