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虾酱是我国及东南亚沿海地区的传统发酵类水产品,因其独特的风味和丰富的营养深受广大消费者的喜爱与青睐。盘锦蜢虾酱是由生长在盘锦地区辽河与渤海交汇处的蜢子虾,与占其比重为15%20%的食用氯化钠混合经数月的发酵得到的。作为发酵水产品中的一类,虾酱中的微生物群落及其微生物的作用一直被广泛关注,本文通过菌落形态特征、16S rRNA分析鉴定了盘锦蜢虾酱中的嗜盐微生物。发现了一株经细胞形态学、生理生化以及分子生物学鉴定为新种的菌株,并命名为盘锦慢生芽孢杆菌(Lentibacillus panjinensis)。主要内容及结论如下:1、实验方法:对原材料收集自盘锦的蜢虾酱进行微生物的分离纯化,在培养皿上挑取单菌落进行革兰氏染色对其进行纯菌的鉴定,后用Tiangen细菌基因组提取试剂盒对在显微镜视野范围内观察颜色一致形态单一的细菌进行DNA的提取,若颜色不一致形态不单一的细菌菌落继续进行纯化。细菌进行DNA提取后,使用琼脂糖凝胶电泳和酶标仪对其浓度进行检验。使用通用引物27F、1492R对DNA进行PCR扩增,得到的PCR产物交于生工生物公司进行测序。以盐浓度分别为5%、10%、15%、20%、25%的浓度梯度进行分离嗜盐微生物的筛选。菌株G56T进行形态学分析(革兰氏染色、扫描电镜观察菌体、鞭毛观察),生理生化实验(糖醇类发酵实验、酶类实验、脂肪酸的测定、极性脂质的检测),分子生物学鉴定(DNA的提取、PCR及测序、系统发育关系的建立)。2、通过对盘锦虾酱中微生物的分离、鉴定及嗜盐性实验发现,有10株菌的耐盐度高达25%,经过DNA的提取及PCR扩增的测序所得到的结果得到,它们分别属于考克氏菌属(Kouria)、别样芽孢杆菌属(Allobacillus)、类芽孢杆菌属(Paenibacillus)、盐水球菌属(Salinicoccus)、芽孢杆菌属(Bcillus)、慢生芽孢杆菌属(Lentibacillus)。3、从盘锦虾酱中分离到革兰氏阳性、需氧、可动、短杆状细菌G56T,其最适生长的盐浓度为10%,最适生长温度为37℃,最适生长的pH值为7.0。菌株G56T对过氧化氢酶和氧化酶呈阳性,但没有还原硝酸盐的能力。可以利用D-核糖、D-木糖、D-半乳糖、甘油、熊果苷、水杨酸、D-甘露糖、D-纤维二糖、N-乙酰氨基葡萄糖、糖原、D-海藻糖为底物产生酸,而不能利用木糖醇、L-山梨糖醇、D–塔格糖、赤藓糖醇产生酸。G56T极性脂质提取物中含有双磷脂甘油、磷脂甘油,主要脂肪酸为anteiso-C15:0(69.7%)和anteiso-C17:0(23.3%),菌株G56T的DNA G+C mol%含量为44.7 mol%。通过多相分类分析,证明菌株G56T(CGMCC 1.17100T)是一种新型的慢芽孢杆菌属内的菌株,并且分离自辽宁省盘锦市,因此命名为盘锦慢生芽孢杆菌(Lentibacillus panjinensis)。结论:本实验通过辽宁盘锦地区蜢虾酱中嗜盐微生物的分离筛选,并得到一株命名为Lentibacillus panjinensis的新菌种,可对今后分析虾酱中微生物群落的多样以及虾酱食品安全研究提供参考。