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目的：检测COPD患者肺组织中mtTFA. COXⅡ的表达、肺血管内皮细胞凋亡的变化,分析它们之间的关系,探讨mtTFA在COPD发病机制中的可能作用。方法：2007年9月至2008年8月在中南大学湘雅二医院胸外科行肺叶切除术或肺段切除术的周围型肺癌患者病例21例,根据COPD诊断标准将其分成两组：非COPD组10例,COPD组(稳定期)11例。TUNEL法检测肺血管内皮细胞凋亡指数,分光光度法检测COX活性,普通RT-PCR和real-time RT-PCR检测mtTFA mRNA. COXⅡmRNA表达,免疫组织化学法和western-blot检测mtTFA蛋白的分布和表达,western-blot检测COXⅡ蛋白表达。使用SPSS 13.0统计软件包进行数据分析,正态分布的各组计量资料以(x±s)表示,两组间均数比较采用独立样本t检验,变量间相关性分析采用单因素直线相关分析(Pearson), P<0.05为差异有统计学意义。结果：COPD组吸烟指数[(33.6±12.0)包年]较非COPD组[(12.1±8.9)包年]高(P<0.01)；COPD组肺血管内皮细胞凋亡指数[(13.8±1.9)%]较非COPD组[(5.9±1.0)%]增高(P<0.01)。COPD组肺组织mtTFA mRNA. mtTFA蛋白的相对表达量分别为(0.59±0.07)和(0.32±0.07),非COPD组肺组织mtTFA mRNA. mtTFA蛋白的相对表达量分别为(0.78±0.06)和(0.55±0.09),COPD组肺组织mtTFA mRNA、mtTFA蛋白表达均较非COPD组明显下降(均P<0.01)。COPD组肺组织COX活性、COXⅡmRNA、COXⅡ蛋白的相对表达量分别为[(4.4±0.9)×10-1]U/mg、(0.72±0.12)和(0.62±0.06),非COPD组肺组织COX活性、COXⅡmRNA、COXⅡ蛋白的相对表达量分别为[(7.6±0.4)×10-1]U/mg、(0.86±0.16)和(0.89±0.13),COPD组肺组织COX活性、COXⅡmRNA和COXⅡ蛋白表达均较非COPD组明显下降(P<0.01,P<0.05,P<0.01)。相关分析显示肺血管内皮细胞凋亡指数与FEV1/FVC、FEV1%Pre呈负相关(r=-0.796,r=-0.827,均P<0.01),与吸烟指数呈正相关(r=0.703,P<0.01)；肺组织COX活性与肺血管内皮细胞凋亡指数呈负相关(r=-0.756,P<0.01)；肺组织mtTFA蛋白表达与FEV1%Pre、COXⅡ蛋白表达、COX活性均呈正相关(r=0.892,r=0.810,r=0.854,均P＜0.01),与肺血管内皮细胞凋亡指数、吸烟指数均呈负相关(r=-0.749,r=-0.763,均P<0.01)。结论：(1) COPD患者肺血管内皮细胞凋亡增加。(2) COPD患者肺组织mtTFA、COXⅡ表达下降,COX活性下降。(3)吸烟可能通过抑制mtTFA表达,从而影响COX活性而参与COPD患者肺血管内皮细胞凋亡。目的：探讨COPD患者肺组织mtTFA基因启动子区甲基化状态。方法：2007年9月至2008年8月在中南大学湘雅二医院胸外科行肺叶切除术或肺段切除术的周围型肺癌患者病例21例,根据COPD诊断标准将其分成两组：非COPD组10例,COPD组(稳定期)11例。收集患者术中肺组织标本,提取肺组织基因组DNA,亚硫酸氢钠基因组测序法(BSP)检测mtTFA基因启动子区甲基化状态。使用SPSS 13.0统计软件包进行数据分析,计量资料以(x±s)表示,两组间均数比较采用独立样本t检验。P<0.05为差异有统计学意义。结果：非COPD患者肺组织mtTFA基因启动子区不存在甲基化的CpG位点,而COPD患者肺组织mtTFA基因启动子区存在多个甲基化的CpG位点,平均甲基化率为(27.8±3.6)%。结论：COPD患者肺组织mtTFA基因启动子区存在甲基化的CpG位点。目的：研究CSE诱导HUVEC凋亡的可能机制,探讨mtTFA在其中的作用,并了解mtTFA基因甲基化是否参与其中。方法：体外培养HUVEC,给予不同浓度(0%-10%)和不同时间(0h-24h)的CSE处理,TUNEL法检测细胞凋亡,分光光度法检测caspase-3的活性。将HUVEC分为四个处理组：空白组,AZA组,CSE(2.5%)组,AZA+CSE组,分别给予不同的干预,检测各组细胞的凋亡指数和COX活性；普通RT-PCR和real-time RT-PCR检测mtTFA、COXⅡmRNA表达,western-blot检测mtTFA、COXⅡ蛋白表达。提取各组细胞基因组DNA, BSP法检测各组mtTFA基因启动子区甲基化状态。用SPSS 13.0统计软件包进行数据分析,计量数据用(x±s)表示,多组间比较采用单因素方差分析(One-Way ANOVA)。变量间相关分析采用单因素直线相关法(Pearson)。P<0.05为差异有统计学意义。结果：CSE诱导的HUVEC凋亡呈浓度依赖和时间依赖。1%CSE组即出现HUVEC凋亡增加[(26.0±2.1)%],2.5%CSE时凋亡指数达到(42.6±2.6)%。此后随着CSE浓度继续增加,虽然凋亡仍在增加,但细胞坏死也逐渐明显。10%CSE干预24 h后HUVEC凋亡达到最高峰(49.5±0.7)%。2.5%CSE干预HUVEC,随着干预时间的延长凋亡逐渐增多。与凋亡相反,随着CSE干预浓度和时间的增加,COX活性下降愈明显,同样呈浓度依赖和时间依赖。10%CSE干预24h后,COX活性下降约25.6%。在较低CSE干预浓度(0.5%-2.5%)时caspase-3活性随着CSE浓度增加而增加,2.5%CSE组达到最大值(255.0±24.2)%。而在较高CSE浓度(5%-10%)干预时,caspase-3活性出现回降,10%CSE组降至(68.6±3.7)%,低于空白对照组。相关分析显示,HUVEC凋亡与COX活性呈负相关(r=-0.884,P<0.01),而与caspase-3活性无关(r=-0.236,P>0.05)。与空白对照组和其他干预组相比,CSE组HUVEC凋亡[(44.0±3.6)%]增加(P<0.01)；而COX活性[(5.94±0.36)×10-1U/mg]、COXⅡmRNA表达(0.82±0.06)、COXⅡ蛋白表达(0.73±0.05)均下降(均P<0.05)；mtTFA mRNA表达(0.40±0.02)和mtTFA蛋白表达(0.39±0.06)也下降(均P<0.01)。而AZA组、AZA+CSE组与对照组比较差异无显著性(P>0.05)。BSP发现CSE组mtTFA基因启动区有多个甲基化CpG位点,平均甲基化率为(26.5±2.4)%。而空白对照组、AZA组、AZA+CSE组mtTFA基因启动区未发现甲基化CpG位点。结论：(1)CSE诱导HUVEC凋亡呈浓度依赖和时间依赖性,该凋亡为非caspase-3-依赖,并由COX介导。(2)CSE可能通过诱导mtTFA甲基化而下调mtTFA表达,从而抑制COXⅡ表达和COX活性,导致HUVEC凋亡增加。