博落回花药离体培养诱导单倍体植株的研究

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博落回(Macleaya cordata (Willd)R.Br.)是罂粟科博落回属植物,含有数种异喹啉类生物碱,是一种很重要的药用植物资源。本论文以8份分别来源于浙江开化(MCK)、湖南高坊(MCG)安徽祁门(MCQ)、福建光泽(MCZ)、贵州凯里(MCL)、贵州松桃(MCS)、重庆秀山(MCX)、湖南炎陵(MCY)的博落回花蕾为材料,对花药离体培养过程中的相关因素进行比较研究,建立了一套比较完善的博落回花药离体培养及植株再生体系。具体的试验结果分述如下:1、本研究以处于单核靠边期的博落回花药作为试验材料,基于花蕾长度和花蕾直径之差这一相对数值作为判断花药发育时期的主要指标,即当博落回的花蕾长度和花蕾直径的差值约为5mm时各产地来源的博落回花药基本上都处于单核中期和单核晚期;当这个差值大于5mm时,大部分产地来源的博落回的花药处于双核期或者已进入成熟期。2、花药接种密度对愈伤组织的形成有影响,D3-D5(240—400粒/皿)处理之间的诱导率最高。鉴于实际工作的需要,本研究的后续试验均采取D4处理(320粒/皿)。3、博落回花药诱导愈伤组织的效果存在地域差异性。MCK、MCG、MCL、MCQ的花药诱导率要明显地高于MCZ、MCS、MCX、MCY的花药,其中MCG的花药的愈伤组织的诱导率为受试样本中最高的,达到了12.6%。同时,在愈伤组织的增殖效果上,也存在产地差异性,MCG来源的博落回花药的增殖转化率是最高的,达到了20.1%,而产地MCL和产地MCS的花药增殖转化率却只有8.9%和5.8%还不到MCG的一半。4、35℃高温预处理能提高博落回花药的诱导率,其中以35℃高温处理2-4d为最佳。另外,通过对三个产地来源的博落回花药的处理可以发现,当处理超过5天后,花药的愈伤诱导率均开始降低。低温处理对提高愈伤组织的诱导率是有利的,但是处理超过4d后诱导率开始降低。5、对于MCK-3和MCG-8的花药来说,在Y1处理下,这两个产地的博落回花药的诱导率均达到最高,分别为22.1%和26.8%。诱导博落回花药产生愈伤组织的最适宜的培养基及激素组合是:MS+0.5mg/L2.4-D+0.5mg/L6BA+3%sucrose+0.8%agarpH5.8。6、不添加任何外源激素的MS培养基有利于博落回再生苗根系的产生。激素处理对博落回再生苗生根作用不明显,无论对于MCK-3还是MCG-8产生的再生苗,只需15d即可长出根,而主根长度和根总数也达到中等水平偏上。7、V营养土:V河沙(1:1)比较适合博落回再生苗的生长,移栽28d后再生苗成活率仍然为100%。8、利用流式细胞术对216株博落回再生苗进行倍性鉴定,结果表明只有6株博落回再生苗为单倍体,占样本总量的3%,二倍体植株为190株占样本总量的88%,13株植株倍性异常,占样本总量的6%,还有一小部分再生苗植株的倍性不明。
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