1.苦参药材的质量评价研究目的:建立苦参药材质量评价方法;方法:采用薄层层析法鉴别苦参;采用分光光度法测定苦参中总生物碱含量;采用HPLC测定苦参药材中指标性成分含量;结果:采用薄层层析法鉴别苦参专属性良好;采用分光光度法测定苦参中总生物碱含量,以苦参碱为对照品对总生物碱进行定量分析,表明苦参总生物碱在0～425.6 ?g范围内与吸光度呈良好的线性关系。平均加样回收率为100.2%,RSD为1.70% (n=6)。测得了八种不同产地或商品地的苦参药材中苦参生物碱部位中总生物碱含量;槐果碱进样量在0.1144～0.5720μg范围内线性关系良好,苦参碱进样量在0.2080～1.0400μg范围内线性关系良好,氧化槐果碱进样量在0.1836～0.9180μg范围内线性关系良好,槐定碱进样量在0.2088～1.044μg范围内线性关系良好,氧化苦参碱进样量在0.2456～1.228μg范围内线性关系良好。槐果碱、苦参碱、氧化槐果碱、槐定碱、氧化苦参碱回收率及其RSD分别为101.6%、1.93,98.29%、1.87,103.85、1.79,99.87%、2.01,102.7%、2.19(n=6)。结论:含量测定结果表明,该方法准确、可靠、稳定性好,可作为苦参药材质量评价方法。2.黄芪药材的质量评价研究目的:建立黄芪药材质量评价方法;方法:采用薄层层析法鉴别黄芪;采用分光光度法测定黄芪中总皂苷含量;采用HPLC测定黄芪药材中黄芪甲苷的含量,色谱柱:迪马ODS柱(5μm,200 mm×4.6 mm);柱温室温;流动相:乙腈-水(30:70);流速1.0 mL·min-1;检测波长203 nm;结果:采用薄层层析法可鉴别出黄芪;采用分光光度法测定黄芪中总皂苷含量,黄芪甲苷在0.0275～0.275mg范围内线性关系良好,方法平均回收率为99.9%,RSD为1.49%;HPLC测定黄芪药材中黄芪甲苷的含量,黄芪甲苷在1.1～11.0μg范围内线性关系良好,相关系数r=0.9998。结论:建立了黄芪药材质量评价方法,简便快捷,专属性良好,可用于黄芪药材的质量控制。3.苦参碱的提取纯化工艺研究目的:优选苦参碱的提取纯化工艺;方法:选取加醇量、提取时间、提取次数为考察因素,以苦参碱、氧化苦参碱总提取量为指标,采用正交设计试验法优选苦参药材的提取工艺;以苦参碱、氧化苦参碱的吸附量为考察指标筛选树脂,并系统研究阳离子交换树脂分离纯化苦参生物碱的吸附和洗脱工艺参数;采用溶媒萃取重结晶法精制苦参碱。结果:确定苦参药材的提取纯化工艺为:苦参药材用60%乙醇回流提取3次,加醇量分别为12、10、10倍,每次提取时间2 h。滤过,合并滤液,回收乙醇,浓缩至苦参药材含量为1 g·mL-1的溶液,盐酸调pH=2后,离心15 min(4000 r·min-1),取上清液,作为样品液。取样品液通过装有732型阳离子交换树脂的色谱柱(径高比1:10),上柱流速为2BV·h-1,样品液上柱量3BV,流出液重复上柱一次,重复上样一次。用6 BV纯化水洗涤,洗脱流速2BV·h-1,水洗液弃去。以氨性乙醇(含20%氨水的80%乙醇溶液)洗脱,流速2 BV·h-1,洗脱3 BV,收集洗脱液。减压回收乙醇,浓缩成相对密度为1.33-1.35(40oC测定)的清膏,干燥,即得苦参总生物碱提取物;确定苦身碱的精制工艺为:取苦参总生物碱提取物100 g,加水1000 mL,加稀盐酸调pH2～3,搅拌使溶解,离心(4000 r·min-1)10 min。取上清液加乙醚充分振摇提取3次,每次500 mL,放置至分层,乙醚层弃去,水层加10%NaOH溶液调pH12-13,加乙醚充分振摇提取3次,每次2000 mL,取乙醚层回收乙醚至近干,残渣加1000 mL石油醚(30～60oC)回流提取,滤过。滤液回收石油醚至约250 mL,放置,挥散石油醚至约100 mL,析出淡黄色结晶。滤过收取结晶,再以石油醚(沸程30～60 oC)1000 mL回流提取溶解,回收石油醚至约250 mL,放置,挥散石油醚至约100 mL,析出结晶,滤过收取结晶,即得。结论:该提取纯化工艺科学合理,稳定可靠,适合于苦参碱的工业化提取纯化。4.黄芪总皂苷的提取纯化工艺研究目的:优选黄芪总皂苷的提取纯化工艺;方法:选取乙醇浓度、加醇量、提取时间、提取次数为考察因素,以黄芪总皂苷总提取量为指标,采用正交设计试验法优选黄芪药材的提取工艺;以黄芪总皂苷的吸附量为考察指标筛选树脂,并系统研究大孔吸附树脂分离纯化黄芪总皂苷的吸附和洗脱工艺参数;结果:确定黄芪药材的提取纯化工艺为:取黄芪药材粉碎成粗粉,加60 %乙醇提取三次,60%乙醇用量为12、10、10倍,每次提取1.5小时,滤过,合并提取液,减压回收乙醇,药液浓缩至每1mL含有1g药材,离心15分钟(4000转/分钟),取上清液作为样品液。取样品液通过装有D101大孔吸附树脂的色谱柱(柱高和柱径比为10:1),上样流速为2BV/h,样品液上样量1BV,流出液重复上样一次。先以2BV纯化水洗涤,洗涤流速2BV/h,纯化水洗液弃去。再以70%乙醇洗脱,流速2BV/h,洗脱4BV,收集洗脱液,减压回收乙醇,浓缩至相对密度1.33-1.35(40oC测定)的清膏,70oC减压干燥,即得。结论:该提取纯化工艺科学合理,稳定可靠,适合于黄芪总皂苷的工业化提取纯化。5.苦参碱肠吸收动力学研究目的:研究苦参碱肠吸收动力学参数,为缓释制剂的设计提供依据;方法:采用大鼠在体单向灌流技术考察苦参碱在肠道的吸收特性;结果:苦参碱在大鼠各肠段吸收顺序依次为:十二指肠、空肠、回肠、结肠,且在肠道中表观吸收系数均大于1.2×10-3 cm·min-1。结论:苦参碱且在肠道中易被吸收,无特定吸收部位,可以制成缓释制剂。6.苦参碱药物动力学研究目的:测定苦参碱的药物动力学参数;方法:HPLC法测定大鼠灌胃及注射给药后血药浓度及组织浓度,采用统计矩法按非隔室模型计算药物动力学参数;采用平衡透析法进行血浆蛋白率的测定;大鼠灌胃给予40mg·kg-1、20 mg·kg-1、10 mg·kg-1三个剂量苦参碱后,测定经尿、粪的累积排泄率。结果:大鼠灌胃苦参碱10, 20, 40 mg后,平均Cmax分别为0.903±0.086, 1.549±0.304,2.797±0.474μg·mL-1 ,平均Tmax分别为105±41.352, 105±16.432,95±12.247min。平均AUC0?t分别为260.603±23.802, 356.135±40.698,619.73±109.395 mg?L-1?min,平均AUC0?∞分别为319.708±31.64, 531.737±78.999,671.229±119.348 mg?L-1?min。平均t1/2分别为178.828±19.095, 293.543±57.266, 109.189±2.978min。大鼠灌胃给药苦参碱10、20和40 mg·kg-1,平均绝对生物利用度为64.7%。苦参碱在大鼠体内存在广泛分布,组织中苦参碱浓度由高到低依次为肾、肝、脾、肺、心、脑、肌肉。苦参碱在大鼠血药透析袋内外平衡时间约为24h,在低、中、高4.18、2.09、1.045μg?mL-1)质量浓度下,其血浆蛋白结合率为(47.8±11.45)%,(31.3±10.83)%,(29.0±8.36)%。大鼠灌胃给予40mg·kg-1、20 mg·kg-1、10 mg·kg-1三个剂量苦参碱后,0～48h尿中苦参碱的累积排泄量占剂量平均百分比分别为37.652%、22.853%、22.383%。各剂量组在48h后基本排泄完全,主要排泄集中在0～24h。大鼠粪样中苦参碱含量极少,基本可以忽略不计,故通过试验确定苦参碱在大鼠体内主要经尿液排泄。结论:得出了苦参碱的药物动力学参数,为缓释剂型的设计和指导临床用药提供科学依据。7.苦芪缓释片制备工艺研究目的:为延长苦参碱的作用时间,减少毒副作用,将其制成缓释片,并对该缓释片的体外释放特性进行研究。方法:利用亲水性凝胶骨架将苦参碱制成缓释片,并进行体外累积释放度测定。以单因素考察和正交设计等实验方法,进行处方工艺的筛选,得到了缓释片的最佳处方工艺。结果:其有效成分体外释放度曲线表明,该缓释片的释药曲线基本符合Higuchi方程,具有缓释片的体外溶出特征。本品每片在2小时、4小时、100小时的释放量应分别为标示量的20%～40%、40%～60%、90%以上,能够使药物持续稳定释放;结论:通过工艺重复性考察,苦芪缓释片制备工艺稳定可行。8.苦参碱和黄芪总皂苷提取物质量标准研究目的:对苦参碱、黄芪总皂苷提取物的质量标准进行研究。方法:采用TLC法鉴别了苦参碱、黄芪总皂苷提取物,采用HPLC法测定苦参碱的含量,采用分光光度法测定黄芪总皂苷提取物中总皂苷含量;采用HPLC法测定黄芪总皂苷提取物中黄芪甲苷的含量;结果:建立了苦参碱、黄芪总皂苷提取物的质量标准草案,经检查三批试制样品均符合规定。结论:建立的质量标准可用于苦参碱、黄芪总皂苷提取物的质量控制。9.苦芪缓释片质量标准研究目的:对苦芪缓释片的质量标准进行研究;方法:采用TLC法鉴别了苦参碱、黄芪总皂苷提取物,采用HPLC法测定苦参碱的含量,采用分光光度法测定黄芪总皂苷提取物中总皂苷含量;采用HPLC法测定黄芪总皂苷提取物中黄芪甲苷的含量;对缓释片中苦参碱释放度做了研究,本品每片在2小时、4小时、100小时的释放量应分别为标示量的20%～40%、40%～60%、90%以上,均应符合规定。结果:建立了苦芪缓释片质量标准草案,经检查三批试制样品均符合规定。结论:建立的苦芪缓释片质量标准可用于该制剂的质量控制。