目的:肺癌是全球范围内最常见的恶性肿瘤,位于癌症所致死亡的首位,已经成为亟待解决的重大公共卫生问题。肺癌的发生与发展是由多因素、多基因参与的多步骤、多阶段过程,具体的分子机制尚未完全清楚。吸烟是肺癌发生的独立危险因素,然而女性更可能罹患非吸烟相关的肺癌。我国女性吸烟率仅为2.7%,而肺癌发病率却达到31.93/10万,该发病率远高于其吸烟率所致期望值。这提示我国女性可能具有较高的肺癌遗传易感性。因此,以中国非吸烟女性肺癌患者为研究对象,排除掉吸烟的干扰后,探寻新的肺癌发生、发展相关基因,阐明其作用机制,有助于肺癌的早期诊断、精准治疗,改善患者的预后。微小RNA(microRNA,miRNA)是一类长度约为19-23个核苷酸,高度保守的、内源性非蛋白编码的小分子RNA。某些肿瘤相关microRNAs可在转录后水平以序列特异性调节的方式调控靶基因(原癌基因和抑癌基因)表达,从而影响肿瘤的发生与发展。microRNA广泛参与肺癌细胞的增殖、转移等恶性生物学行为,并与肺癌的病理分型、TNM分期、生存时间等关键的预后指标相关。p53是一个多功能转录因子,可以调控部分microRNAs表达,反之,microRNA也可以在转录后水平直接或间接调控p53表达,从而形成一个反馈回路。miR-34是首先被证实的p53靶向microRNA,随后更多p53信号调控网络相关microRNAs(如miR-26,miR-145,miR-605,miR-31等)被发现。p53可诱导或抑制这些microRNAs的表达,后者调控多种下游靶基因,影响细胞周期和细胞凋亡等通路信号。microRNA在成熟的过程中可能发生基因突变,从而引起单核甘酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)。microRNA-SNP可能影响pri-microRNA的转录、pre-microRNA的加工处理以及成熟microRNA对于靶基因的调控能力等,进而导致个体肿瘤易感性的差异,且与预后有关,影响癌症复发以及患者的治疗效果和生存时间等。目前,仅有两项研究探讨miR-26a1 rs7372209与肺癌发病之间的关系,发现二者间无关联;miR-605 rs2043556与肺癌发病之间的关系在男性和女性患者中结论不一;尚未见miR-34b/c rs4938723、miR-145 rs353291和miR-31 rs13283671与肺癌发病之间的关系研究。在预后方面,有一项研究显示miR-26a1 rs7372209并不影响手术完全切除的肺癌患者的复发时间;另一项研究中miR-145 rs353291、miR-31 rs13283671与肺癌预后之间的关系在两阶段不同人群中得到相反的结论;尚未见miR-34b/c rs4938723、miR-605 rs2043556与肺癌预后之间的关系研究。本研究拟运用系统评价方法,筛选miR-26,mi R-34,miR-145,miR-605和miR-31在肺癌中异常表达及其与预后关系的研究文献,明确这些p53相关microRNAs表达情况与肺癌发病和预后之间的关系;然后,选择miR-26a1rs7372209,miR-34b/c rs4938723,miR-145 rs353291,miR-605 rs2043556和miR-31 rs13283671五个SNPs位点,以中国非吸烟女性肺癌患者为研究对象,探讨各基因型和非吸烟女性肺癌发病风险和总体生存时间之间的关系,并且探索基因-基因之间的交互作用,进一步识别非吸烟女性肺癌相关microRNA,以期为女性肺癌的早期诊断、精准治疗,改善患者的预后提供科学依据。研究方法:本研究第一部分采用系统评价方法,在PubMed、Web of Science英文数据库,万方和中国知网中文数据库中检索有关肺癌发病和预后中miR-26,miR-34,miR-145,miR-605和miR-31表达特征的相关文献,严格遵照纳入与排除标准筛选文献;提取包括作者姓名,发表年限,样本量,microRNA名称,microRNA表达检测方法、microRNA表达情况等相关信息。本研究第二部分采用病例对照研究方法,450例病例为2010年7月至2012年12月来源于合作医院住院的经组织病理学确诊的新发非吸烟女性肺癌患者,用频数匹配的方法按照年龄±5岁选取同期在社区的非吸烟健康女性450名作为对照,所有研究对象均为沈阳市汉族人。签署知情同意书后,收集血液样本,并通过面对面访谈收集人口学及环境暴露因素等资料。采用TaqMan real-time PCR方法检测、判定基因型。应用SPSS19.0软件进行统计分析,χ~2检验或t检验比较分类变量或连续变量在病例组和对照组中的分布差异。以单因素和多因素Logistic回归模型计算各因素的比值比(OR)及其95%可信区间(confidence interval,CI),分析各基因与肺癌易感性的关系及基因-基因的交互作用。本研究第三部分研究对象包括非吸烟女性肺癌患者450例,开始纳入病例的时间为2010年7月,随访终止时间为2016年2月。随访方式为沈阳市疾病预防控制中心死亡登记报告系统、公安户籍管理系统和电话随访等确定患者的死亡时间。最终有26名病例失访,失访率为5.78%。应用SPSS19.0软件进行统计分析,采用Kaplan-Meier和Log-rank检验对患者的一般特征、临床特征及SNP基因型进行统计和生存分析,单因素和多因素Cox回归模型计算粗风险比(hazard ratio,HR)、校正后的HR及95%可信区间(95%CI)。研究结果:本研究第一部分通过筛选miR-26,miR-34家族,miR-145,miR-605和miR-31在肺癌中的异常表达及其与预后关系的相关研究文献,提取和整合数据进行系统性分析,发现miR-26b,mi R-34家族,miR-145和mi R-605在肺癌中的表达呈现下调,可能具有肿瘤抑制作用;miR-31在肺癌中的表达呈现上调,可能具有致癌作用;而miR-26a相关研究结果尚未一致,两项研究结果显示miR-26a在肺癌组织中上调,但另两项研究结果与之相反,miR-26a在肺癌组织中下调。在肺癌预后方面,mi R-145低表达与不良预后有关;miR-31高表达与不良预后有关;有3项miR-34家族与肺癌预后关系研究结果各异;miR-26和mi R-605表达与预后的关系尚未见报道。第二部分我们探讨了miR-26a1 rs7372209,mi R-34b/c rs4938723,miR-145rs353291,miR-605 rs2043556和miR-31 rs13283671与非吸烟女性肺癌发病风险之间的关系,发现在全部肺癌病例中,经年龄调整后,携带miR-34b/c rs4938723 CC基因型者的肺癌发生风险是携带TT野生型者的1.838倍(95%CI:1.092-3.092),是携带TT+TC基因型者的1.758倍(95%CI:1.055-2.929)。在肺鳞癌患者中,携带miR-34b/c rs4938723 CC基因型者的发病风险是携带TT基因型者的2.557倍(95%CI:1.206-5.422),并且在显性遗传模型和隐性遗传模型中均得到相近的结果;携带miR-605 rs2043556 GG基因型者的发病风险是携带AA野生型者的2.115倍(95%CI:1.028-4.518),是携带AA+AG基因型者的2.079倍(95%CI:1.013-4.267)。在肺腺癌患者中,携带miR-26a1 rs7372209 TT基因型者的发病风险是携带CC+CT基因型者的1.789倍(95%CI:1.022-3.131)。多因素分析结果显示miR-34b/c rs4938723 CC基因型是肺癌的独立危险因素,miR-34b/c rs4938723 CC基因型和miR-605 rs2043556 GG基因型是肺鳞癌的独立危险因素。交互作用分析显示,与同时携带miR-26a1 CC和miR-34b/c TT基因型者相比,携带miR-26a1 TT和miR-34b/c CC基因型者发生肺癌的风险分别升高了1.648倍(OR=2.648,95%CI:1.200-5.845)和1.292倍(OR=2.292,95%CI:1.056-4.978),而同时携带miR-26a1 TT和miR-34b/c CC基因型者可能有更高的肺癌发病风险(OR=3.362,95%CI:0.872-12.961)。与同时携带miR-26a1 CC和miR-605 AA基因型者相比,携带miR-26a1 TT和miR-605 GG基因型者发生肺癌的风险分别升高了1.250倍(OR=2.250,95%CI=1.010-5.011)和0.607倍(OR=1.607,95%CI:0.775-3.331),同时携带两个突变纯合基因型者肺癌发生的风险升高了2.000倍(OR=3.000,95%CI:0.777-11.585)。第三部分我们探讨了miR-26a1 rs7372209,mi R-34b/c rs4938723,miR-145rs353291,miR-605 rs2043556和miR-31 rs13283671对非吸烟女性肺癌预后的影响。单因素Cox回归分析结果发现miR-26a1、miR-34b/c、mi R-145、mi R-605和miR-31与肺癌预后之间的关系没有统计学意义。经过年龄、临床分期、化疗和手术情况校正后,携带mi R-26a1 rs7372209 TT基因型的患者与携带CC野生型的患者相比生存时间缩短,并显著增加了肺癌死亡风险(HR=1.573,95%CI:1.013-2.442)。在肺腺癌患者中,与携带CC野生型的患者相比,携带miR-26a1rs7372209 TT基因型的患者肺腺癌死亡风险增高(HR=1.682,95%CI:1.057-2.678);与携带CC+CT基因型的患者相比,携带TT基因型的患者总体生存率下降,与肺腺癌的不良预后有关(HR=1.660,95%CI:1.061-2.597)。在肺鳞癌患者中,尚未发现microRNA基因多态性与其不良预后有统计学关联。多因素Cox回归分析结果显示miR-34b/c CC基因型(HR=0.609,95%CI:0.377-0.985)是非吸烟女性肺癌患者预后的独立影响因素,携带miR-34b/c CC基因型患者总体生存率提高。在肺腺癌患者中,miR-34b/c CC基因型同样为影响肺腺癌患者预后的因素(HR=0.550,95%CI:0.315-0.963)。交互作用分析结果发现miR-34b/c与miR-26a1之间存在负交互作用,在对于预后的影响中,miR-34b/c的作用更为明显(HR=0.452,95%CI:0.240-0.851)。同时携带mi R-34b/c CC基因型和miR-145AA野生基因型的患者与携带miR-34b/c TT基因型和miR-145 AA野生基因型的患者相比可降低肺癌死亡风险(HR=0.402,95%CI:0.191-0.849)。同时携带miR-605 GG基因型和miR-26a1 CC基因型的个体预后较好(HR=0.431,95%CI:0.229-0.814)。mi R-605和miR-145之间进行交互作用分析时,同样发现了miR-605在改善肺癌预后中所起到的作用(HR=0.403,95%CI:0.191-0.850)。结论:1、在肺癌中,mi R-26b、miR-34家族、miR-145和miR-605可能起到抑癌基因的作用,而miR-31可能起到促癌基因的作用。MiR-145低表达、miR-31高表达与肺癌不良预后相关。2、miR-34b/c和miR-605基因多态性是非吸烟女性肺癌的独立的危险因素;miR-26a1和miR-34b/c、miR-605基因多态性对非吸烟女性肺癌的发生存在交互作用。3、miR-34b/c基因多态性是非吸烟女性肺癌预后的生物标志物,mi R-34b/c CC基因型可改善非吸烟女性肺癌的预后。