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目的:为了进一步研究神经损伤修复的机制及探索肌腱组织工程研究中支架材料和种子细胞的变化情况,选择两种蛋白质-神经生长因子(Nerve growth factor,NGF)和胶原蛋白(Collagen),将卫生检验中的高新技术与生化和临床医学理论研究相结合,建立激光诱导荧光检测-毛细管电泳分析这两种蛋白质的方法,为指导临床采用神经生长因子治疗疾病和寻求组织工程技术治疗肌腱缺失的最佳条件,提供快速、灵敏的分析手段和可靠的实验数据。 方法:考察了影响上述两种蛋白质测定的各种因素,分别进行了如下工作: 1.NGF的纯化 采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离纯化了大鼠脊髓中的NGF,利用反相高效液相色谱(RP-HPLC)检测产品的纯度,Western杂交法检验其免疫活性。为建立神经生长因子的毛细管电泳免疫分析方法提供高纯度的NGF(抗原)。 2.激光诱导荧光检测-毛细管电泳免疫分析NGF 大鼠脊髓样品中的NGF经磷酸盐溶解及真空冷冻干燥浓缩后,与异硫氰酸荧光素(FITC)标记的NGF单克隆抗体发生抗原抗体的特异性结合反应,经毛细管区带电泳分离复合物、游离抗体和游离的FITC,测定了大鼠脊髓损伤前后