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背景：在我国，小细胞肺癌(SCLC)每年影响约40万名患者，其五年生存率仅为6%，严重危及患者生命。SCLC的常规治疗以放化疗为主，但由于其恶性程度高、倍增时间短以及耐药等特点，SCLC的预后较差，针对这种治疗现状，人们急需找到一种有效且副作用小的靶向治疗方法。BRD4是一种转录和表观遗传调控因子，在介导与癌症有关的基因表达中起重要作用；BRD4抑制剂在多种癌症的临床和临床前研究中取得了很好的效果，但在小细胞肺癌中的研究极少。因此本课题利用经典的BRD4抑制剂JQ1，研究了BRD4抑制对于小细胞肺癌细胞系H446和H69的作用及其相关机制。
方法：首先，通过MTT实验检测JQ1对小细胞肺癌细胞株H446和H69的增殖抑制效果；采用流式细胞术研究JQ1对H446和H69细胞周期和凋亡的影响；然后利用SA-β-Gal染色实验检测胞内β-半乳糖苷酶活性；EdU掺入实验检测DNA合成的变化；运用免疫荧光实验检测JQ1诱导细胞内DNA损伤情况；接着，通过Westernblot实验检测衰老信号通路关键蛋白表达水平的变化；运用qPCR实验技术检测衰老相关炎症因子的表达；运用细胞TUNEL染色和Westernblot实验检测凋亡信号通路关键蛋白表达水平的变化；最后通过小鼠异种移植瘤模型，组织SA-β-Gal染色，TUNEL染色和免疫组织化学(IHC)探究小鼠肿瘤组织内相关信号通路激活情况。
结果：体外实验结果表明，JQ1可以显著抑制小细胞肺癌H446和H69细胞的增殖，进一步研究发现，JQ1能够诱导H446和H69周期阻滞于G0/G1期并且发生凋亡。经过进一步的研究发现，JQ1能够在较低浓度下(10和35μM)诱导H446细胞衰老，这些细胞显现出β-半乳糖苷酶活性升高，周期相关蛋白CDK4表达水平显著下降，DNA合成减少，细胞内DNA损伤应答激活，衰老信号通路相关蛋白表达升高等表型。较高浓度的JQ1(35μM与60μM)处理激活了H446细胞内的凋亡信号通路，这些细胞TUNEL染色阳性比率显著升高，凋亡关键蛋白cleavedCaspase9和cleavedPARP表达水平显著上升。接下来的小鼠皮下成瘤实验结果显示，JQ1能够显著抑制小鼠肿瘤的生长，且对小鼠没有显著的毒性作用。肿瘤组织SA-β-Gal染色，TUNEL染色和IHC的结果显示，JQ1能够诱导肿瘤内细胞衰老和凋亡途径的激活。
结论：体外和体内实验结果证明，JQ1可以有效抑制小细胞肺癌的增殖，诱导细胞发生衰老和凋亡。本研究在抑制BRD4对小细胞肺癌的作用及其相关机制方面，进行了初步探索，为以BRD4作为靶点的小细胞肺癌治疗提供了新的思路。
方法：首先，通过MTT实验检测JQ1对小细胞肺癌细胞株H446和H69的增殖抑制效果；采用流式细胞术研究JQ1对H446和H69细胞周期和凋亡的影响；然后利用SA-β-Gal染色实验检测胞内β-半乳糖苷酶活性；EdU掺入实验检测DNA合成的变化；运用免疫荧光实验检测JQ1诱导细胞内DNA损伤情况；接着，通过Westernblot实验检测衰老信号通路关键蛋白表达水平的变化；运用qPCR实验技术检测衰老相关炎症因子的表达；运用细胞TUNEL染色和Westernblot实验检测凋亡信号通路关键蛋白表达水平的变化；最后通过小鼠异种移植瘤模型，组织SA-β-Gal染色，TUNEL染色和免疫组织化学(IHC)探究小鼠肿瘤组织内相关信号通路激活情况。
结果：体外实验结果表明，JQ1可以显著抑制小细胞肺癌H446和H69细胞的增殖，进一步研究发现，JQ1能够诱导H446和H69周期阻滞于G0/G1期并且发生凋亡。经过进一步的研究发现，JQ1能够在较低浓度下(10和35μM)诱导H446细胞衰老，这些细胞显现出β-半乳糖苷酶活性升高，周期相关蛋白CDK4表达水平显著下降，DNA合成减少，细胞内DNA损伤应答激活，衰老信号通路相关蛋白表达升高等表型。较高浓度的JQ1(35μM与60μM)处理激活了H446细胞内的凋亡信号通路，这些细胞TUNEL染色阳性比率显著升高，凋亡关键蛋白cleavedCaspase9和cleavedPARP表达水平显著上升。接下来的小鼠皮下成瘤实验结果显示，JQ1能够显著抑制小鼠肿瘤的生长，且对小鼠没有显著的毒性作用。肿瘤组织SA-β-Gal染色，TUNEL染色和IHC的结果显示，JQ1能够诱导肿瘤内细胞衰老和凋亡途径的激活。
结论：体外和体内实验结果证明，JQ1可以有效抑制小细胞肺癌的增殖，诱导细胞发生衰老和凋亡。本研究在抑制BRD4对小细胞肺癌的作用及其相关机制方面，进行了初步探索，为以BRD4作为靶点的小细胞肺癌治疗提供了新的思路。