T淋巴细胞相关亚群变化在急性胰腺炎疾病发展中的意义

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目的:研究T淋巴细胞相关亚群在急性胰腺炎发病过程中的免疫表征变化并探讨其意义。方法:设置急性胰腺炎(AP)组及健康对照组。AP组收录5例符合急性胰腺炎诊断标准的胰腺炎患者,收集患者信息,每名患者分别采集发病后第一天、第三天、第七天这三个时间点的外周血样本10ml,进行离心后去上清收集全血细胞。健康对照组收录同时期5例健康体检人员,抽取健康组5例人员外周血液样本10ml进行离心后去上清收集全血细胞。共得到血液样本共20管,血液样本通过Ficoll密度梯度离心法分离出PBMC(外周血单个核细胞)后继续制成单细胞悬液后,选择42个免疫相关点位或者受体,进行细胞内外相关marker的染色后,于Cy TOF(质谱细胞流式技术)仪器上收集相关数据,用Xshift聚类分析出相关联的亚群类别,MST可视化及vi SNE散点图进行分析各类亚群、各maker表达情况,深度分析胰腺炎患者不同时间点的、以T淋巴细胞为主的免疫表达差异,通过t检验对所有亚群变化进行统计分析,找出变化有意义的亚群,分析有变化意义的亚群细胞的比例变化、代谢特征、效应因子及共抑制分子的表达情况。结果:1.急性胰腺炎组病人与健康对照组病人相比,血清AMS、CRP、中性粒细胞表达均升高,具有显著差异。2.T细胞相关亚群表达情况:急性胰腺炎组病人与健康对照组病人,其外周血中有10组淋巴细胞亚群的表达具有显著变化:(1)亚群C22、C17(中性粒细胞亚群)、C26(Fox P3+,CD152-CTLA-4+RORr+,CD154-CD40L+的嗜酸性粒细胞亚群),在急性胰腺炎的疾病发展中较健康对照组表达明显上升。(2)C13(单核巨噬细胞亚群)、C14(CD38+,CD39+的常规树突状细胞亚群)、C27(嗜酸性粒细胞亚群)、C28(CD8a+初始T细胞)、C31(CD8+效应记忆T细胞)、C34(CD8+,h-m-GranzymeB+效应记忆T细胞)、C38(CD4+效应记忆T细胞)在急性胰腺炎的疾病发展中较健康对照组表达明显下降。差异都具有统计学意义(P<0.05)。3、健康对照组和急性胰腺炎组中差异表达的16种marker:CD27,CD14,Lag-3,CD39,PD-L1,CD59,Gata3-h/m,CD127,CTLA-4,FoxP3,CD137,RORy,CD154,h/m-Granzyme B,HLA-DR,CD8a的免疫特征(p<0.05,符合同一分布的概率,普遍意义上认为在一次实验中,这样的样本组是真的有差异)。其中CD27,CD39,HLA-DR,CD8a,CD127较健康对照组差异性下降,CD14,Lag-3,CD39,PD-L1,Gata3-h/m,h/m-Granzyme B,CD154,RORy,CD137,FoxP3,CTLA-4较健康组差异性上升。共抑制因子PD1、CD28、Tim-3在急性胰腺炎疾病发展中无明显表达。结论:1、急性胰腺炎的免疫抑制可能与CD38+,CD39+的常规树突状细胞亚群、CD8a+初始T细胞亚群、CD8+效应记忆T细胞、CD8+,h-m-Granzyme B+效应记忆T细胞亚群、CD4+效应记忆T细胞亚群的细胞占比下降有关。2、CD14,Lag-3,CD39,PD-L1,Gata3-h/m,h/m-Granzyme B,CD154,RORy,CD137,Fox P3,CTLA-4在急性胰腺炎发展中表达量呈现显著性上升,预示其可能被用作急性胰腺炎的潜在生物标志物。CD27,CD39,HLA-DR,CD8a,CD127在急性胰腺炎发展中显著性下降,预示其可能是急性胰腺炎潜在的提示预后指标或者治疗靶点。3、共抑制因子PD1、CD28、Tim-3在急性胰腺炎疾病发展中无明显表达。
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