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目的:骨关节炎(osteoarthritis,OA)是一种以关节软骨进行性退变、破坏以及骨赘形成为特征的慢性骨关节病,好发于膝关节、髋关节、脊柱以及远端指间关节等负重较大的关节。临床可产生关节疼痛,活动受限和关节畸形等症状。膝关节是OA最常发生的部位,研究发现水通道蛋白3(Aquaporin3,AQP3)能够推动膝OA的发展,膝OA患者软骨细胞的AQP3表达明显高于正常关节软骨细胞。膝OA作为一种老年进行性退化性疾病,目前尚无彻底治愈的手段,主要采取手术和非手术治疗来延缓病情的进展,而电针是一种具有较好临床疗效的非手术治疗方式。目前电针治疗膝OA的临床观察较多,但以其作为干预手段进行作用机制研究的动物实验却比较少见。因此,本课题采用管型石膏伸膝位固定制动法固定6周制作兔膝OA模型,电针干预4周的治疗,来探讨电针对兔膝OA发展及其关节软骨中AQP3表达的影响以及通过调控AQP3的表达来干预膝OA发展的可行性,为膝OA的治疗寻找新靶点。方法:(1)预实验:泸州医学院实验动物中心采购健康新西兰大白兔5只,雌雄不拘,重量2.3-3.2kg,取右后膝关节用管型石膏固定在膝关节伸直位,固定范围从腹股沟平面下1.5cm到踝关节下3cm处。制动6周后,手术刀切取股骨内侧髁及胫骨平台的软骨组织,进行苏木精-伊红染色。结果可见软骨细胞排列紊乱、有增生,软骨表面变薄、有裂隙产生、软骨组织纤维化,软骨和滑膜肿胀,有炎细胞的浸润,滑膜增生。与骨关节炎的病理表现复合,说明造模成功。(2)对象和干预措施:泸州医学院实验动物中心再次采购健康新西兰大白兔36只,雌雄不拘,重量2.3-3.2kg,采用随机数字表法将36只白兔随机分成空白对照组、模型组和实验组,每组各12只。空白对照组不做任何处理,模型组和电针治疗组均造模,6周后,取下石膏管型。模型组造模后不做电针治疗,只在电针治疗组电针的同时用相同的姿势绑在治疗台上;电针治疗组自取下石膏当天开始给予电针治疗。取血海、犊鼻、阴陵泉、阳陵泉、足三里、梁丘6穴,接3组电针仪输出线,输出频率为2Hz的疏波,留针20min,每日1次,连续治疗14天。实验结束后,采用颈椎脱臼法处死所有兔子,观察相关指标的变化。(2)指标的观察:①依照改良的Mankin’s评分标准对空白对照组、模型组、电针治疗组3组兔右后膝关节软骨大体形态采用肉眼观察的方法进行量化评分;②手术刀切取空白对照组、模型组、电针治疗组3组兔右后膝关节的股骨内侧髁软骨,用10%中性甲醛溶液固定后,再行石蜡包埋和切片,作HE染色,依照改良的Mankin’s评分标准对软骨细胞的形态采用光镜的方法对观察结果进行量化评分;③酶联免疫吸附剂测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测膝关节液中AQP3表达:用抗兔人AQP3的ELISA试剂盒检测所采集兔右后膝关节液中AQP3的表达。(3)统计学处理:采用SPSS17.0统计学软件进行统计学分析。所得计量资料结果采用x±s表示,采用t检验比较兔软骨细胞评分、软骨结构评分、HE染色评分和潮线完整性评分,以P<0.05为有统计学意义。结果:(1)软骨大体形态观察:空白对照组12只兔右后膝关节无关节积液,无炎性细胞的浸润,软骨表面光滑、无裂纹,呈蓝白色,色深明亮。软骨大体形态的改良Mankin’s评分为0分。模型组右后膝关节出现明显关节积液,软骨表面粗糙、有裂纹、光泽度降低,有炎性细胞的浸润,软骨表面呈灰黄色,部分出现糜烂和溃疡;电针治疗组与模型组情况类似,但损害程度较轻,按改良的Mankin’s评分比较软骨结构,差异有统计学差异(P<0.01)。(2)HE染色病理学观察:空白对照组示关节软骨细胞位置排列整齐,细胞大小相同,潮线完整;软骨层厚度一致,软骨表面平坦整齐;模型组软骨层存在缺损,软骨层变薄,软骨细胞减少明显,细胞大量簇聚,潮线紊乱;电针治疗组关节软骨表面无明显缺失,软骨细胞排列较模型组整齐,数量较模型组增多,层厚较模型组增厚,可见潮线紊乱。将空白对照组与模型组、模型组与电针治疗组的改良的Mankin’s评分结果进行比较,差异均有显著性意义(P<0.05)。(3)免疫学ELISA法测定AQP3表达:3组中都检测到AQP3的表达,但模型组AQP3表达水平明显高于空白对照组和电针治疗组(P<0.05)。结论:(1)管型石膏伸膝位固定制动法成功建立了兔膝骨关节炎模型。(2)膝OA关节软骨中AQP3表达增强。(3)电针能够有效缓解膝OA的症状,其作用机制可能与通过减少AQP3的含量调节水的转运,降低细胞基质的降解,减轻对关节软骨的破坏,从而缓解膝OA的进程有关。